假阳性是指出现的 PCR 扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。
产生的原因有:
①引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的序列;
②靶序列太短或引物太短;
③靶序列或扩增产物的交叉污染。
解决方法有:操作轻柔,防止靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外造成污染;除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材高压消 毒;离心管及加样枪头等一次性使用。必要时,可在加标本前,将反应管和试剂用紫外光照射,以破坏存在的核酸。