qPCR 技术重要的参数指标解析:
1、扩增及溶解曲线:
扩增曲线是PCR过程中,以循环数为横坐标,以荧光强度为纵坐标所绘制的曲线。主要用于反映qPCR的动态进程;溶解曲线是用来验证扩增产物特异性的,如果产物是单一条带,溶解曲线就会出现单峰,如果有引物二聚体或其它非特异性扩增,就会出现至少两个峰。
2、荧光域值(threshold):
是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍,即:threshold。
3、Ct 值:
是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。将已知浓度的标准品梯度稀释进行qPCR,按照起始DNA量由多到少的顺序等间隔得到一系列扩增曲线。Ct值与起始模板数的对数值之间存在线性关系,可以制作标准曲线。未知浓度的样品也得到Ct值,代入标准曲线,就可以求出未知样品的起始模板量。