试剂配制: 1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。 2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。 3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 实验标准品图: 40 ng/L,5号标准品,150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 20 ng/L,4号标准品,150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 10 ng/L,3号标准品,150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 5 ng/L,2号标准品,150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 2.5 ng/L,1号标准品,150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 测定步骤: 1.加样 1. 除包被外都需45度加样 2.加样体积要准确 3.管底加样,不能加在管壁上 4.加样时不能产生气泡 2.温浴 1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。 2.各ELISA板不应叠在一起。 3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。 4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。 3.洗涤 1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。 2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。 4.读板 1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。 2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间*控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请*乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 ADAM11 去整合素样金属蛋白酶11抗体 ADAM12 去整合素样金属蛋白酶12抗体 ADAM15 去整合素样金属蛋白酶15抗体 ADAM2 去整合素样金属蛋白酶2抗体 ApoER2 载脂蛋白E2受体抗体 ADORA1 腺苷A1受体抗体 AQP0 水通道蛋白0抗体 AP2 gamma 转录因子AP-2γ抗体 ANGPTL5 血管**素相关蛋白5 ANKRD53 锚蛋白重复域53抗体 ANKRD54 锚蛋白重复域54抗体 ATP5B ATP合成酶β5抗体 ALS2CR3 肌侧索硬化症相关蛋白3抗体 ADORA2B 腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体 ALS2CR1 肌侧索硬化症相关蛋白1抗体 APBA2 β淀粉样前体蛋白结合蛋白2抗体(X11β) Diazepam Binding Inhibitor 乙酰辅酶A结合蛋白抗体 phospho-CDC16(Ser560) 磷酸化细胞分裂周期蛋白16抗体 AHI1 白血病相关蛋白AHI1抗体 AICDA 活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶抗体 ABCA9 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白9抗体 ARF3 ADP核糖基化因子3抗体 AARSD1 含丙氨酰tRNA合成酶结构域1抗体 AMIGO1 粘附分子IgG样结构域蛋白1抗体 KAL1 卡尔曼综合症基因1抗体 ASB7 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族7抗体 ASB17 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族17抗体 ASB12 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族12抗体 ATPase Na+/ K+ beta 2 钠钾ATP酶通道蛋白抗体 AGXT2L2 AGXT2L2蛋白抗体 ANKS1B β淀粉样蛋白胞内结构域相关蛋白1抗体 ANKS6 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白6抗体 ART3 二磷酸腺苷核糖基转移酶3抗体 ART5 二磷酸腺苷核糖基转移酶5抗体 AMPD1 腺苷单磷酸脱氨酶1抗体 Ankyrin erythroid 红细胞蛋白Ank1抗体