人低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA**

参数规格

保存条件：2-8℃低温保存
保质期：6个月，所有试剂盒均提供批次。
试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。
选型：
产品规格：48T /96T
96T指可以做94个标本-2个标准对照-84个样本
48T指可以做47个标本-1个标准对照-42个样本
试剂配制：
1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
实验标准品图：
40 ng/L，5号标准品，150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
20 ng/L，4号标准品，150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
10 ng/L，3号标准品，150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
5 ng/L，2号标准品，150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
2.5 ng/L，1号标准品，150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

测定步骤：产品仅用于科研使用，不得用于临床．
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样，不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
注意事项
   1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
   2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
   3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
   4．请每次测定的同时做标准曲线，*做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请*乘以总稀释倍数（×n×5）。
   5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
   6．底物请避光保存。
   7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
   8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
   9．本试剂不同批号组分不得混用。
  10．如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
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