Determination of Forsythin content in Shexiang Jiegu Jiaonangby HPLC
【Abstract】 OBJECTIVE:To set up a method for quality control ofShexiang Jiegu Jiaonang METHOD HPLC method was developed toquantitative determination. COLUMN Agilent Technologies ZORBAXExtend-C18 4.6×250mm, 5μm.The mobilic phase wasacetonifrile-water (21:79V/V).The column temperature was 30℃,thewavelength for detection was 203nm,flow rate was 1.0ml·min-1.RESULTS The paeonol average of recovery rate was 97.6%, andRSD was 1.0%(n=6). CONCLUSION The method is simple, accurateand suitable for its assaying.
【Key word】 HPLC; Shexiang Jiegu Jiaonang; Notoginsenoside R1;determination
麝香接骨胶囊为《卫生部药品标准》第五册（中药成方制剂）收载的品种，由赤芍、三七、当归、续断、苏木、麝香等22味中药组成，具有散瘀止痛，续筋接骨之功效。临床用于跌打损伤，筋伤骨折，瘀血凝结，闪腰岔气[1]。**中三七为主药之一，三七皂苷R1为其主要有效成分，原标准中无含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定麝香接骨胶囊中三七皂苷R1的含量，以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方法，现报告如下。
1 仪器与试药
LC－2010A 高效液相色谱仪，CLASS－VP色谱工作站，紫外检测器；三七皂苷R1对照品（批号：110745-200312），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；麝香接骨胶囊为市售样品（辽源市亚东中药有限责任公司，规格0.3g·粒-1，批号：060801，061102，060912）。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm,5μm；流动相：乙腈-水（21：79，V/V）；检测波长：203nm；流速：1.0ml·min-1；柱温：30℃。理论板数按三七皂苷R1峰计应不低于4000。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成0.25mg·ml-1的对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成0.05mg·ml-1的对照品溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备取装量差异项下的麝香接骨胶囊内容物，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加水饱和的正丁醇30ml使溶解，加氨试液振摇提取3次，每次15ml，合并氨试液提取液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，与上述正丁醇液合并，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移置10ml量瓶中，加甲醇稀释置刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，即得[2]。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
取除三七皂苷R1以外的**中其余药材的十分之一量，按法制成胶囊，再按供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。
2.3 专属性试验
分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（三七皂苷R110.971min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。
2.4 线性关系考察
精密吸取三七皂苷R1对照品贮备液（浓度：0.25mg.ml-1）适量，加甲醇配成浓度分别为0.005、0.01、0.05、0.10、0.15、0.25mg·ml-1的溶液6份，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，得三七皂苷R1的回归方程为：A=392250.2C +8620.1，r=0.9998（n=6）。结果表明，三七皂苷R1在0.005～0.25mg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取三七皂苷R1对照品溶液（0.05mg·ml-1）10μl，在上述色谱条件下重复进样6次，求得三七皂苷R1溶液峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.3%（n=6），表明精密度较好。
2.6 稳定性试验
精密吸取三七皂苷R1对照品溶液（0.05mg·ml-1）10μl，在0、4、8、12、24、48h分别进行测定，结果表明三七皂苷R1对照品溶液在48h内稳定，RSD为0.4%（n=6）。
2.7 重复性试验
取供试品（批号061101），共6份，分别按“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进行测定，求得三七皂苷R1含量的RSD为1.6%（n=6），表明重现性较好。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品（批号061101，三七皂苷R1含量0.93mg·g-1，平均装量0.2996g·粒-1）适量，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入三七皂苷R1对照品贮备液（0.25mg·ml-1）各3ml，按“2.2.2供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。表1 三七皂苷R1加样回收率试验（略）
2.9 样品含量测定
分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定三批样品中三七皂苷R1峰面积，按外标法计算其含量（n=5），结果见表2。表2 3批样品含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 通过对3批样品中三七皂苷R1的测定，结果表明*高含量为0.31mg·粒－1，*低为0.27mg·粒－1，综合考虑确定限量每粒含三七皂苷R1不得低于0.20mg。
3.2 流动相的选择 试验中采用不同的流动相甲醇-水（25︰75），乙腈-水-冰醋酸（25︰75︰0.5），结果表明采用流动相乙腈-水（21︰79）的色谱图基线较稳。
3.3 本方法结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，可以作为该制剂的质量控制方法。