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牛肉片中(饲料)的粗蛋白含量检测方案

一．原理
凯氏法测定样品中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
二．试剂
1) 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。
2) 混合催化剂：1g硫酸铜，9g硫酸钾，均为化学纯，磨碎混匀。
3) 氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/v）。5%水溶液（m/v）
4) 硼酸：化学纯，2%水溶液（m/v）。
5) 混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
6) 盐酸标准溶液：c(HC1)=0.1mol/L。9ml盐酸（分析纯），注入1000ml蒸馏水中。
7) 硼酸吸收液：2%硼酸溶液（20 g/L）：称取100 g 硼酸，加水溶解后并稀释至5000 mL。加入（1：3.5混合指示剂6ML）摇匀，再加入5%的氢氧化钠稀释溶液0.35ML摇匀，颜色呈紫红色。
三．仪器设备
1) 实验室用样品粉碎剂或研钵
2) 分析天平：感量0.0001g
3) 消化炉（SKD-20S2）
4) 容量瓶100ml
5) 滴定管：10、25ml
6) 消化管：300ml
7) 定氮仪(SKD-1000)
四．分析步骤
1 样品的消化
称取样品0.5~1g(含氮量5~80mg)准确至0.0002g，放入消化管中，加入5g混合催化剂，与样品混合均匀，再加入10ml硫酸，将消化管置于消化炉上加热，直至呈透明的蓝绿色，然后在继续加热，至少30分钟。
2 SKD-20S2消化炉
操作（6个样品和2个空白）
按”SET”键+“A/M”键3秒，跳出**设置区程序参数修改界面。连续按“SET”键数次出来
检查“RUN”=“3”，pro= “ 1 ” ，再设置r1 =200，T1=5分钟，c1=180度，r2=180，T2=10,C2=250度，r3=180， T3=5, C3=350度，r4=200，T4=90，c4=410，r5=0，T5=0,C5=0度。。。。r32=0,t32=0,c32=0,设置好后等几秒钟，程序会自动保存。

再打开启动开关（绿开关）-----------程序自动运行，自动结束。如果出现不运行，再检查“RUN”设置为“3”，pro= “ 1 ” 。

3 SKD-1000全自动定氮仪
样品消化好后，冷却至室温。
蒸馏设置：碱45ml，稀释液40ml，标准酸0.0911（mo/l），蒸馏功率一百%，蒸馏时间6分钟，硼酸仪器自动加。

氮含量计算公式

重复性计算公式

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