改良番茄汁琼脂培养基基础

改良番茄汁琼脂培养基基础

        (Modified Tomato Juice Agar Base)

用    途：

用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数(GB/T16347-1996，GB/T4789.35-2003和SN/T1941.1-2007)。

原    理：

          番茄汁可提供碳源、蛋白质等营养物质；牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。

配方（每升）：

*终pH 6.8±0.2

使用方法：

1、切碎洗净的新鲜番茄，放入三角瓶，置4℃冰箱8—12h，取出后用纱布过滤。称取本品60g，加入950 ml蒸馏水或去离子水和50ml番茄汁，搅拌加热煮沸至完全溶解，校正pH后分装三角瓶，121℃高压**15min。

2、无菌操作将经过充分摇匀的检样25g（或25mL），放入含有225mL**生理盐水的**广口瓶内，振摇均匀，即为1：10稀释液，依次做1：100、1：1000……稀释。

3、选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，吸取1mL稀释液于**平皿中，每个稀释度做2个平皿。

1、 将培养基凉至50℃左右，将培养基注入平皿中约15mL，待琼脂凝固后，翻转平板，置于36±1℃温箱中培养72±3h。

2、 选择菌落数在30—300个之间的平皿进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽孢的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌落计算出该皿内的乳酸数，然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如，检样10-4的稀释液在改良TJA培养基平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实为乳酸菌的是4个，则1 mL检样中乳酸菌数为：

4

               35× — ×104＝2.8×105

                    5

质量控制：

          下列菌株接种后于36±1℃培养72h结果如下：

贮    存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

规    格：250g

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