1 二手高效液相色谱仪测定头孢 Waters2695+2996高效液相色谱仪,包括Waters2695四元泵、在线真空脱气机、柱温箱、自动进样器;DAD 检测器和Empower化学工作站(美国沃特世公司);头孢克洛δ-3-异构体对照品(中国药品生物制品检定所,批号:130494-200402);头孢克洛胶囊(回音必集团浙江亚东制药有限公司,规格为0.25 g,批号:050816、 0509001、0509002、0509003)。
2 方法与结果
2.1 二手高效液相色谱仪测定头孢的色谱条件
色谱柱:Cosmosil ODSQB柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相:磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾 6.8 g,加水溶解并稀释至1000 mL,用磷酸调节pH 至3.4)-乙腈(90:10),流速:1 mL/min,紫外检测波长:254 nm,进样量:20μL。
2.2 系统适用性试验
精密称取头孢克洛对照品和头孢克洛δ-3-异构体对照品适量,加流动相溶解并制成每1mL中含头孢克洛和头孢克洛δ-3-异构体各约0.2 mg的混合溶液,进样,记录色谱图。中国药典规定,头孢克洛和头孢克洛δ-3-异构体的色谱峰分离度(R)应大于 1.5,而理论塔板数按头孢克洛色谱峰计算不低于 1500。试验结果,头孢克洛和头孢克洛δ-3-异构体的色谱峰R为3.48,理论塔板数为11350。
2.3 标准曲线的制备
精密称取头孢克洛对照品(含量94.0%)巧1119 9 置50 mL量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取此液1、2、3、4、5 mL,置5 mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀作供试液,进样,记录色谱图,结果见表1。以供试液浓度(C)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,计算得回归方程:A=26550 C +20.452,r=0.9998,可见头孢克洛浓度在0.0564 ~0.282 g/L范围内与其峰面积呈线性关系。