双黄连口服液—连翘苷的含量—二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液
应用范围： 本方法采用二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液中连翘苷含量。
本方法适用于由金银花,黄芩,连翘等精制而成的双黄连口服液中连翘苷的含量测定。
方法原理： 反相固相萃取法处理样品,再以反相高效液相色谱作定量分析;色谱条件:ＰＲＯＤＩＧＹＯＤＳ (150ｍｍ×4.6ｍｍ,5μｍ)Ｃ18柱为色谱柱,甲醇 水 冰醋酸=40 60 1为流动相,检测波长为227ｎｍ。连翘苷色谱峰与其它色谱峰分离良好。
试剂： 1. 甲醇(色谱纯)
2. 冰醋酸(分析纯)
仪器设备： 1 仪器
1.1 二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液
1.2 色谱柱
Ｃ18色谱柱(150ｍｍ×4.6ｍｍ,5μｍ)，Ｓｅｐ-ＰａｋＣ18微柱
2 色谱条件
2.1流动相：甲醇 水 冰醋酸=40 60 1
2.3柱温：35℃
2.4流速：1.0mL/min
2.5检测波长：227nm
试样制备： 1.标准溶液的制备
取连翘苷对照品5ｍｇ,精密称定,加40%甲醇溶液溶解并稀释至25ｍＬ,为0.2ｍｇ·ｍＬ-1的对照品溶液,再分别吸取上述溶液适量,各加40%甲醇溶液稀释为含连翘苷0.1,0.04,0.02,0.01,0.005ｍｇ·ｍＬ-1的对照品标准溶液。
2. 供试品溶液的制备
取样品溶液(0009031)5ｍＬ,置50ｍＬ容量瓶中,加甲醇20ｍＬ,摇匀,用水稀释至刻度,为供试品溶液。取上述溶液,过Ｓｅｐ-ＰａｋＣ18微柱(先以甲醇10ｍＬ过柱活化,再以水10ｍＬ洗涤,然后加几管空气挤干,备用),流速为3～5(ｍＬ·ｍｉｎ-1),以2(ｍＬ/管)收集流出液,共收集11管。分别吸取上述对照品溶液20μＬ,注入色谱仪,以流出体积为横坐标,吸收峰面积为纵坐标作流出曲线,在第5管即第10ｍＬ处连翘苷流出已达平衡。取样品溶液5ｍＬ,按过微柱,收集第14～16ｍＬ流出液,即得。
操作步骤： 1.标准曲线的绘制
分别吸取对照品溶液20μＬ,注入色谱仪中测定,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标作回归曲线。
2. 二手高效液相色谱仪测定双黄连口服液供试品的测定
取样品溶液4批,分别制成供试品溶液,依法测定连翘苷含量。