电细目镜下的质粒DNA形态

电细目镜下的质粒DNA形态 
 
1、目标

仔细查看质粒DNA 在电镜下的形态，掌握质粒DNA 的电镜制样原理和办法。
 

球状氨基酸普通都可以在低盐溶液或蒸馏自来水表面形成不溶解的改变性别薄膜，若液体浓度合宜，则肽链延长扩展形成氨基酸单分子层。普通用碱性氨基酸包围带阴电的核酸分子，当氨基酸展开时，核酸也随之展开，核酸的形态结构将维持一定的完整性。而后将核酸分子捞到支持膜上，通过负染色，就可以在电镜下仔细查看电热恒温鼓风干燥箱。

2、材料、试药和摄谱仪

1、醇化的质粒DNA 样品。

2、火棉胶。

3、CH3COOH异戊酯。

4、整洁铜网。

5、真空干燥箱。

6、CH3COOH铀水溶液。

7、铂铱合金。

8、展开贮备液(0.1mg/L细胞色素C，1mol/LCH3COOH铵)。

9、滑石粉。

10、电细目镜。

3、操作步骤

1、称取3克火棉胶溶解于100ml的CH3COOH异戊酯中，制成3％的溶液。

2、用小镊子谨慎地将整洁的铜网间隔一定距离排列在膜上干燥箱。

3、在这些个铜网上轻轻遮盖一张合适体积的滤纸，待滤纸潮湿润泽后将滤纸连同铜网、火棉胶膜轻轻捞起，铜网上进放于一整洁培育皿中晾干备用。

4、将核酸样品（液体浓度为5mg/ml-10mg/ml）加到展开溶液中，终液体浓度为1mg/ml.5mg/ml，作为相片比本人好看液。

5、用CH3COOH双氧气铀染色15分钟，蒸馏水洗3次，每每10分钟，晾干备用。

6、用滴管汲取该液，滴1－2滴于保洁的水面上，当CH3COOH异戊酯挥发后，在水面上形成一层平均的火棉胶膜。

7、将整洁的载玻片斜放在培育皿中，在自来水表面撒小量滑石粉，以指使单分子膜的展开事情状况。

8、将重蒸水灌注整洁的培育皿中，作为下相液。

9、取50ul左右的相片比本人好看液，在离下相液外表1cm处轻轻滴到斜面上，使相片比本人好看液缓缓触动到下相液外表并形成一层单分子膜。

10、用小镊子夹着铜网，膜面朝下，轻轻沾取下相液外表的核酸分子。用滤纸吸去骈枝的液体，晾干备用。

11、在真空喷镀仪中用铂铱合金投影，以进一步增加电子反差。

12、电镜仔细查看。