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受体菌感觉态细胞的制备
日期：2025-03-09 21:31
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摘要：
受体菌感觉态细胞的制备
普通地，新制备的感觉态细胞48h后转化速率减低，15d后失去效力。因为这个，感觉态细胞不可以保留太久，4℃保留一周，但-80℃可保留1年。用玻璃管分装可防止反反复复冻熔，损因感触而悲伤受态细胞。
当球菌处于容易借鉴外源DNA的状况时，即为感觉态，而用理化手眼使球菌处于感觉态的操作为致敏过程。感觉态细胞制备是重组基因能否成功实现转化的一个关紧的技术环节。本尝试是经过钙离子来引诱使之变成感觉态细胞。
材料和办法
1． 材料：结肠杆菌
2． 摄谱仪：
离心思，恒温摇床，恒温水浴，超净办公台，冷柜
3． 试药
LB营养物质，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴
TFB：10Mm MES（pH6.3）
45Mm MnCl2
10Mm CaCl2
10Mm KCl
操作步骤
结肠杆菌在LB营养物质平板上划线培育12-16钟头，挑取单菌落于LB营养物质摇瓶培育结肠杆菌到对数期。取1ml培育物7000rpm，离心3min，使聚在一起菌体。再重复一次。冰浴安放。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。使聚在一起菌体，冰浴安放。用预冷的氯化钙悬浮菌体，冰浴15min, 7000rpm离心3min。使聚在一起菌体，冰浴安放。参加200μl预冷的氯化钙（或TFB），安放于冰浴，即得感觉态细胞，此细胞可现用，也可施行下步操作。将悬液分装于无菌离心管中，投入液氮，而后储于-70℃保留。