高通量DSF快速分析热稳定性Tm方法在单抗 NISTab中的应用及与DSC方法的比较分析

NISTmAb 是一种广泛表征的单克隆抗体，旨在用作开发**蛋白表征新技术中的标样。在本应用文献中，我们使用 SUPR-DSF 来获取 NISTmAb 的差示扫描荧光法（DSF）的数据，并将结果与差示扫描量热法 (DSC)进行比较。SUPR-DSF 解析了 NISTmAb 所有的三个结构域： CH2(69oC), CH3(83oC)和高解链温度的 FAB 结构域(94oC)[1]。此外， 所测得的 Tm 值与文献的报道完全一致。这些结果证明了，应用 SUPR-DSF 可以轻松获得高质量的蛋白质稳定性信息。

Protein Stable 公司的 SUPR-DSF 可以通过检测蛋白质内源荧光的峰位移，并快速准确地测量解链温度。 结果表明 SUPR-DSF 能够获得准确的解链温度， 包括像 Fab 结构域这样的超高解链温度(94 oC)。这也验证了基于内源荧光法的 SUPR-DSF 可以获得与 DSC 一致的结果。利用 384 孔板进行测试的优势在于提高了通量，增加了便利性同时降低了样品的消耗。

方法   

浓度为 1mg/ml 的 NISTmAb 在 pH6 的 L-组氨酸缓冲液中进行配制， 分别加到 384 孔 PCR 微孔板中，每个孔用量是10μL。分装后，将微孔板离心 60 秒后，用透明胶膜密封。将 SUPR-DSF 中的连续升温程序设置成以每分钟 1oC 的升温速率测量 15oC 到 105oC 的荧光光谱。荧光光谱所获得的数据， 通过 BCM 方法进行计算处理，并量化光谱偏移。 BCM 的数据会处理成温度的函数，并转换成一阶导数再进行分析。根据导数的峰值计算解链温度。所有样品的方法和结果均可获取。