Nano-100微量分光光度计性能研究
微量分光光度计是一类很重要的实验仪器，相比以比色皿作分光容器的方法更**、更节省样品，因而深受用户好评。自微量分光光度计问世以来，Thermo公司的Nanodrop系列产品一直占据着市场的主要份额，其性能得到国内外一致肯定,与此同时，国内很多厂商也纷纷涉足超微量分光光度计产业。随着国内超微量分光技术的发展，杭州奥盛仪器公司推出了Nano-100微量分光光度计，该仪器能快速检测核酸、蛋白质及细胞溶液，上样量仅需0.5-2ml，实验结果具准确性高、稳定性好，且相对进口仪器有很大的价格优势，因而成为近年来国内热门的新生代核酸及蛋白浓度测定仪，深受用户好评。
为验证Nano-100的性能，现将其与某公司的超微量分光光度计作对比实验。
1、仪器与耗材
Nano-100（杭州奥盛）微量分光光度计由广州飞迪生物科技有限公司提供；某公司的超微量分光光度计由华南农业大学某实验室提供；测试样品为dsDNA，由杭州奥盛仪器有限公司提供，出厂时由Thmero 公司的Nanodrop 2000测定浓度为：标准品1=984 ng/ml，标准品2=1204 ng/ml，保存于-20℃。稀释标准品用的ddH2O由华南农业大学兽医学院某实验室提供。
测试地点：华南农业大学某实验室。
2、实验方法
dsDNA标准品的稀释：分别吸取标准品1和标准品2各5ml至PCR管中，各加入5ml ddH2O，振荡混匀后，转移其中5 ml至一新的PCR管中，再加入5ml ddH2O，以此类推，每次稀释2倍，共作5次梯度稀释。
dsDNA标准品浓度的测定：用移液枪吸取1 ml标准品，分别在两款仪器上检测浓度,记录数据，并做线性拟合，计算260/280,260/230平均值，并计算标准偏差（SD）和变异系数（CV%）
3、实验结果
为方便制作曲线，我们将稀释倍数*高的待测管定义为1倍浓度，则稀释前标准品的浓度为该测试管的32倍。两种标准品的测试结果如表1及表2所示。两款分光光度计均表现出来了很高的准确度，测量200ng/ml以上的浓度误差均在2%以内。但是两者在测量100ng/ml以下的浓度时，与预测的浓度有一定偏差，但两者的测试结果依旧十分接近。
表1. 标准品1（dsDNA）的检测结果（ng/ml）
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名称
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1×浓度
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2×浓度
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4×浓度
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8×浓度
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16×浓度
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32×浓度
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|
Nano-100
|
22.94
|
48.73
|
110.45
|
226.76
|
490.33
|
995.00
|
|
某公司的仪器
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23.60
|
51.10
|
110.40
|
233.70
|
498.60
|
980.60
|
|
标准品
浓度
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30.75
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61.50
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123.00
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246.00
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492.00
|
984.00
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表2. 标准品2（dsDNA）的检测结果（ng/ml）
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名称
|
1×浓度
|
2×浓度
|
4×浓度
|
8×浓度
|
16×浓度
|
32×浓度
|
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Nano-100
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31.54
|
65.01
|
140.22
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289.92
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625.49
|
1219.51
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某公司的仪器
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29.90
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62.90
|
139.10
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296.80
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628.60
|
1188.10
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标准品
浓度
|
37.63
|
75.25
|
150.50
|
301.00
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602.00
|
1204.00
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线性定量分析对微量分光光度计有重大意义，体现分光光度计测试结果的可靠性及准确测试的范围。对两款仪器的测试结果进行线性分析，结果如图1和图2所示。两种仪器的测试读数均表现出极高的线性，R2均达到0.998以上。Nano-100在两种标准品的测试中，R2均达到了0.999，线性结果非常好，结果输出是线性的，测试的结果非常可靠。
在微量分光光度计测试中，OD260/280以及OD260/230比值是评价样品纯度的重要指标。对纯的dsDNA，OD260/280约为1.8左右，大于1.9说明样品有RNA污染，小于1.8说明有蛋白质污染；纯的DNA的OD260/230约为2.5，通常数值在2.0-2.5之间，低于2.0说明有碳水化合物或有机溶剂污染。而在本次测试中（结果见表3、表4），两款仪器均能正确反映出OD260/280及OD260/230的值，且数值十分接近。值得注意的是，在测试低浓度（约50ng/ml）样品时，两种仪器均出现读数偏差，对同样的标准品，OD260/280及OD260/230的值偏低，未能显示在正常范围。因而在使用时，若需检测核酸纯度，样品浓度尽量控制在50ng/ml以上。
表3.Nano-100稳定性分析
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浓度倍数
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1
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2
|
4
|
8
|
16
|
32
|
|
260/280
|
1.69
|
1.74
|
1.83
|
1.85
|
1.91
|
1.91
|
|
260/230
|
1.69
|
2.00
|
2.14
|
2.25
|
2.25
|
2.13
|
|
检测浓度
|
22.94
|
48.73
|
110.45
|
226.76
|
490.33
|
995.00
|
260/280：mean=1.82；SD=0.090；CV%=4.93%
260/230：mean=2.08；SD=0.21；CV%=10.1%
表4.某公司的仪器稳定性分析
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浓度倍数
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1
|
2
|
4
|
8
|
16
|
32
|
|
260/280
|
1.61
|
1.71
|
1.79
|
1.83
|
1.87
|
1.92
|
|
260/230
|
1.96
|
2.02
|
2.18
|
2.24
|
2.22
|
2.13
|
|
检测浓度
|
23.60
|
51.10
|
110.40
|
233.70
|
498.60
|
980.60
|
260/280：mean=1.78；SD=0.11；CV%=6.31%
260/230：mean=2.13；SD=0.11；CV%=5.30%
1、总结
本实验通过对Nano-100进行浓度测定，线性拟合，稳定性测试等评估，充分证明了杭州奥盛Nano-100的巨大潜力，加之价格相比进口的产品有更明显的竞争优势，采购时间短，售后服务更**合理。因而，拥有高性价比的Nano-100更能适应国内实验室的发展。
广州飞迪生物科技有限公司
2015年6月19日