上一期,《WB干货丨返校后你必须要知道的WB样本前处理产品组合方案》给大家讲到了蛋白定量产品,大家可能会好奇,到底蛋白定量产品应该如何选择合适的呢?接下来为大家揭晓:
蛋白定量目前*丨受欢迎的要数BCA法和Bradford法了:
BCA法:可耐受去污剂:SDS、TritonX-100,Tween-20等,但不耐还原剂,若样本含有去污剂不含还原剂,可使用该法(推KTD3001)
Bradford法:可耐受耐受大部分样品中的化学物质,不耐高浓度去污剂,若样本含有高浓度的去污剂,可使用该法(推KTD3002)
蛋白定量之后,做蛋白分析自然是广大WB实验者*关心的问题了。
第1步是上样了,上样过程中,除了大家不能忘记的样本顺序之外,*重要的要数蛋白Marker了,为了能清楚地指示蛋白分子量大小,有的资丨深WB操作者会选择点2-3个预染蛋白孔,避免实验的不确定性,提高指示的清晰度。这里为大家推荐两款彩色预染蛋白marker:
从实验效果图来看,BMM3001 和BMM3002 marker的色彩鲜明,清晰度和对比度是非常高的。指示结果的参考价值都是非常高的。
经过紧张漫长的跑胶转膜步骤之后,终于进入了WB的免丨疫步骤阶段。这时如何正确的选择内参抗体,将成为WB实验辅助的重要步骤,下面干货又来了——三大正确内参选择的法宝:
1. 样本种属来源:哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,植物实验样本选用plant actin、Rubisco等
2. 蛋白分子量:应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上;对于超过100 kDa的高分子量蛋白,推荐使用Vinculin粘着斑蛋白作为内参抗体。
3. 蛋白表达部位:根据蛋白表达位置的不同可以选择更加合适的抗体。常用的广泛性的β-actin、β-tubulin、GAPDH;检测细胞核Lamin A、Histone H3、PCNA,检测细胞膜Na,K ATPase等等。
除了内参抗体之外,靶蛋白抗体的选取才是WB实验的点睛之笔,说到这里你可能会考虑:如何才能选到特异性强,灵敏度高,文献支持多的抗体呢?试一试Abbkine的**一抗吧,该抗体经过了Abbkine对抗体功能性质进行精心试验,可以试试。
另外,如果样本是带有蛋白标签的重组蛋白检测也能提供对应的标签抗体及其直标抗体。
Flag标签小鼠单克隆抗体,货号:A02010
GFP标签小鼠单克隆抗体,货号:A02020
GST标签小鼠单克隆抗体,货号:A02030
HA标签小鼠单克隆抗体,货号:A02040
还有偶联试剂盒,LIKINE系列的试剂盒,偶联的抗体等,都是可以的。
实验的*后,当然是显色液的使用了,Abbkine ECL显色液可达到皮克级别和飞克级别。这个灵敏度是非常可观的。SuperLumia高敏以及超敏ECL产品具有极高的灵敏度, 对样品和抗体的需求量更低;发光信号强烈且持续时间长。
SuperLumia HRP底物ECL高敏试剂盒,货号:K22020
Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域,致力于创丨新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒,以期成为生命科学研究发展、药丨物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免丨疫研究用户*喜爱的产品,从免丨疫学基础产品,如蛋白提取定量,到免丨疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等;细胞研究用户*喜爱的产品,从用于检测细胞状态的染料及试剂盒,细胞器提取试剂盒,细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品,到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒,只为助力您的研究事业!