调节性T细胞(T-Reg细胞)是一种特殊的T细胞系,对控制自身耐受和炎症反应至关重要。调节性T细胞对于调节免 疫稳态和抑制不同疾 病环境中的免 疫反应具有至关重要的作用,它能通过抑制CD4+辅助性T细胞和CD8+细胞毒性T细胞的激活和分化,对自体和肿瘤表达的抗原产生反应性。Treg细胞表达特异性转录因子Foxp3,因而,CD4+CD25+Foxp3+被认为是Treg细胞的经典标记组合。
但是问题来了,选什么亚型,选什么来源,选什么荧光?
说到这儿,想必大家都很想知道,CD4+CD25+FOXP3+Treg调节性T细胞检测试剂盒(TregFlowEx Kit)#ED7417能否解决这一难题呢?
CD4+CD25+FOXP3+Treg调节性T细胞检测试剂盒反应种属:人;应用类型:流式细胞术,FC;原理: 用于流式细胞术检测人外周血或脐带血中的调节性T细胞Treg (CD4 + CD25 + FOXP3 +)的百分比。
CD4+CD25+FOXP3+Treg调节性T细胞检测试剂盒组分:固定与裂解液、破膜剂、封闭缓冲液、CD4-FITC/CD25-PE抗体预混液,以及FOXP3-APC抗体。
实验流程如下:
1.表面染色:
1.1在试管中添加10µl CD4 FITC/CD25 PE试剂。
1.2添加100µl人血。
1.3混合均匀,在冰箱(2−8℃)的黑暗中孵育10分钟。
1.4(可选清洗)洗涤池,加入2mL冷PBS,在300 g下离心5分钟,4℃。
1.5吸入上清液,立即进入细胞内染色。
2.细胞内染色
2.1加入1mL稀释的冷固定和溶解液。
2.2混合并在冰箱(2−8℃)黑暗中孵育10分钟。
2.3添加0.5mL渗透溶液。
2.4混合并在冰箱(2−8℃)黑暗中孵育10分钟。
2.5在400 g条件下,4℃下将细胞离心5分钟。(离心前,请勿在固定/烫发混合物中添加任何其他缓冲液)
2.6去除(脱蜡)上清液。
2.7添加50µL冷阻缓冲液。
2.8添加50µL冷PBS。
2.9混合并在冰箱(2−8℃)的黑暗中孵育5分钟。
2.10加入5μl FoxP3 APC试剂。
2.11混合并在冰箱(2−8℃)的黑暗中孵育30分钟。
2.12. 用2ml冷PBS冲洗细胞两次,在400 g下离心5分钟,4℃。吸入/脱出上清液。
2.13. 在PBS中加入300µl 1%甲醛,并将染色样品存放在2−8℃下,直到流式细胞仪测定。4小时内分析处理样品。
结果展示:
使用TregFlowEx试剂盒中对人CD4阳性淋 巴细胞进行流式细胞术多色染色。 Treg细胞(CD4 + CD25 + FOXP3 +)位于右上象限。
文章来源:https://www.amyjet.com/featured/treg.shtml