Puromycin嘌呤霉素盐酸盐

 Puromycin嘌呤霉素盐酸盐

背景：

嘌呤霉素是一种由链霉菌中获取的氨基核苷***，它能抑制真核和原核生物的核糖体上发生的肽基转移。该***可以作用于革兰氏阳性菌和各种动物、昆虫细胞。**和革兰氏阴性菌对其不敏感源于对该***的渗透率较低。但是在一些特别的条件下，嘌呤霉素可作用于大肠杆菌。30多年来，嘌呤霉素作为研究蛋白合成的基本工具被广泛使用。如今，嘌呤霉素盐酸盐更可以用来挑选有该***抑制基因的质粒。

嘌呤霉素是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构, 能够同氨基酸结合，代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合，并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。

化学性质

CAS : 58-58.2

分子式：C₂₂H₂₉N₇O₅.2HCl

分子量：544.43

结构式： 

嘌呤霉素的抗性

Pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰基转移酶（PAC），被链霉菌产生的菌株取代。它位于PUR区，这里连接了其他决定嘌呤霉素生物合成途径的基因。

Pac基因的表达阻碍了嘌呤霉素转染哺乳动物细胞表达它。在某些特定条件下，嘌呤霉素亦可用来挑选大肠杆菌的质粒中携带pac基因的菌株。

筛选条件

嘌呤霉素对大肠杆菌感染性较低，但是在关于哺乳动物细胞的实验中很用。在转染实验中，它可以替代新霉素系统。

哺乳动物细胞

嘌呤霉素在哺乳动物细胞系反应中的有效浓度范围从1-10μg/ml。实验初始，我们建议，决定实验中***的*适浓度的方法是首先该浓度可以杀死自身宿主细胞系。

嘌呤霉素可以迅速消灭不含有pac基因的真核细胞。死亡细胞从平板分离，该平板可以用于简单和初期的转化克隆细胞鉴定。建议筛选哺乳动物细胞的*适浓度应当低于所列浓度值。

哺乳动物细胞筛选方法

嘌呤霉素常用浓度范围在1 - 10 μg/ml。等转化出含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的普通培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。

1.在转染的48小时内，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

注意：细胞在快速增殖时，***作用*明显。如果细胞浓度过大，***产生的效力也会下降。细胞*好在他们融合率不高于25%时分裂*佳。

2.每隔3-4天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

3.筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。

4.转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基培养7天。这次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

储存条件和稳定性：

嘌呤霉素可在室温中运输，收到产品之后应该存放在4℃的环境中。

嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。为了达到*理想的稳定状态和*长的保质期，*好存放于-20°C环境中，保质期为2年。

质量控制和溶解方法：

HPLC控制，产品纯度大于98%。溶解方法，5-50 mg/mL in dH2O, store at -20℃。

注意事项：

嘌呤霉素是一个有毒化合物，小心拿放。

GeneOpration 嘌呤霉素产品的应用实例

1.为了说明Parp1基因和ADP核糖多聚体位于Dnmt1启动子上和说明Parp1能够保护自己的非甲基化状态，向培养基中加入了GeneOpration公司的嘌呤霉素。至该文献

2.为了研究生化信号通路能够在嘈杂的分子环境下传递信息，采用GeneOpration的puromycin以6 ug/mL浓度进行细胞筛选实验。至该文献

3.为了研究p300调控的AML1-ETO融合蛋白乙酰化对白血病发生至关重要，采用GeneOpration的puromycin以1 ug/ml浓度进行细胞筛选实验。至该文献

4.为了研究E3连接酶对于维持离子稳态所起的作用，使用了GeneOpration嘌呤霉素来进行细胞培养。至该文献

5.为了证实在p53缺失的细胞中，被O-GlcNAc修饰的IKKβ的催化活性有所增强，使用了GeneOpration的嘌呤霉素来筛选感染病毒的细胞。至该文献

6.为研究跨膜交互作用在KAI1/CD82介导的对癌症侵入和转移的抑制作用中所发挥的角色，将GeneOpration提供的嘌呤霉素用于选择稳定的Du145-sh2和-sh3转导子 。至该文献

7.为了研究Per1在调节肝脏对四氯二苯并-p-二恶英反应中的作用，使用了GeneOpration公司的嘌呤霉素来培养细胞。至该文献

8.为了证实蛋白激酶PKR可以诱导细胞凋亡和抑制缺乏C蛋白的麻疹病毒亚型的生长，使用了GeneOpration公司的嘌呤霉素来进行细胞培养。至该文献

订购信息（适用于细胞培养）