B族维生素是一类水溶性小分子化合物，该类化合物不具备相似的结构，普遍以辅酶的形式广泛参与到各种生理过程中 。目前已知的B族维生素主要为：维生素B1（硫铵）、维生素B2（核黄素）、维生素B3（烟酸）、维生素B5（泛酸）、维生素B6（吡哆醇）、维生素B7（生物素）、维生素B9（叶酸）、维生素B12（钴胺素），今天来了解下维生素B1.
维生素B1或者硫胺素是一种提供糖类代谢需要的元素，帮助身体获得能量的基本无机物。它能够帮助保持**神经系统的正常运行。缺乏维生素B1可能导致体重减少、微弱或者不规律的心跳速率、情绪失调和韦尼克脑病。
由于维生素B1有小粒径和低分子量，是确定动态光散射（DLS）浓度限制的理想样品，本文通过DLS测试维生素B1粒度。
图1 维生素B1化学结构
01
介绍
动态光散射（DLS）是一种用来表征在悬浮液或溶液中颗粒和分子粒度的物理技术。此技术基于随时间发生的散射光信号强度变化。颗粒产生散射光，颗粒的随机运动产生散射光的波动。通过测试散射光，可以得到颗粒的运动速度；通过颗粒的运动速度，可以用斯托克斯-爱因斯坦方程计算出颗粒的水动力学粒径。
做好DLS测试的一个重要因素是使用正确的浓度。颗粒浓度必须足够高以便产生好的散射强度。另一方面，浓度如果太高可能产生多重散射，得到一个错误的结果。
检测角度也会影响结果。例如，侧向散射（90°）适用于弱散射样品，包括小颗粒和透明样品；背散射（175°）适用于强散射样品，包括大颗粒、高浓度或者浑浊样品。安东帕Litesizer 500的一个独特功能是它的自动测试角度选择，允许仪器选择*佳的测试角度。此选择基于样品的连续透光率测试。此功能对于用户处理未知或者不熟悉样品非常有用。
图｜Litesizer 500
02
实验
用去离子水制备三种浓度（50,80和100 mg/ml）的维生素B1溶液，然后在测试前用20 nm针孔过滤器（Whatman Anotop 10）过滤。维生素B1的名义粒径大小是0.6 nm。所有测试在25 ℃下，用安东帕Litesizer 500操作8次以便验证测试重现性。每个样品的*佳测试角度由仪器自动选择（如图2）。
图2 软件中的自动角度选择功能
03
结果与讨论
应用如图2软件的自动测试角度选择功能，三种不同浓度维生素B1的平均水动力学直径的测试结果如表1所示。系统自动为所有三个测试选择侧向散射（90°）。测试角度选择基于安东帕Litesizer 500对所有样品连续监控的透光率检测。
维生素B1的名义粒径是0.6 nm，因此100 mg/ml溶液的结果比50和80 mg/ml溶液更加准确。在此情况下，浓度对测试结果有重要影响，即浓度越低偏差越大。
表1 不同浓度维生素B1自动选择测试角度的平均水动力学粒径
*每次测试重复七次
04
结论
在这个研究中，DLS测试*合适的浓度可以通过测试小粒径和小分子量样品例如维生素B1来确定。
安东帕Litesizer 500的自动测试角度选择功能消除用户在测试角度选择方面，尤其针对未知或者不熟悉样品角度如何选择的困扰。