施灸赫依三穴对**模型大鼠行为学及脑组织ＩＬ－ ６含量的影响

乎宝力格１，高玉峰１＊ ，苏日古嘎２

 （１ ．内蒙古民族大学附属医院，内蒙古  通辽０２８００７；２．内蒙古民族大学，内蒙古  通辽０２８０００）

摘    要：目的：观察施灸赫依三穴对**模型大鼠行为学及脑干组织中ＩＬ－６ 含量的影响。方法：将６０只正常雄性ＳＤ 大鼠按体重随机分为６ 组，分别为正常组、模型组、安定组、顶会穴组、赫依穴组和黑白际穴组，每组各１０只。除正常组外，其余５ 组腹腔注射 ＰＣＰＡ 混悬液（１ｍＬ／１００ｇ），连续注射２ 天制造大鼠**模型。成功造模后进行干预：正常组常规喂养；模型组每天抓取固定１次，常规喂养；安定组灌胃安定（***）注射液（０．９２ｍｇ／ｋｇ），每日１次，连续灌胃７天；顶会穴组、赫依穴组和黑白际穴组分别施灸相应的穴位，每日施灸１次，每次５ｍｉｎ，连续７天。通过转棒平衡实验和定位航行实验观察比较各组大鼠棒上停留时间和找到平台的时间，并采用 ＥＬＩＳＡ 法检测大鼠脑干ＩＬ－６ 的含量。结果：转棒平衡实验：模型组大鼠在转棒上维持时间缩短，与正常组比较差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。与模型组比较，安定组、赫依穴组、顶会穴组、黑白际穴组大鼠在转棒上维持的时间显著增加，差异具有统计学意义

（Ｐ＜０．０５）；定位航行实验：模型组大鼠找到站台的时间延长，与正常组比较差异具有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）。与模型组比较，安定组、赫依穴组、顶会穴组、黑白际穴组大鼠找到站台的时间显著缩短，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；模型组大鼠脑干中ＩＬ－６ 含量显著高于正常组，差异具有统计学意义（Ｐ＜ ０．０５）。与模型组比较，安定组、赫依穴组、顶会穴组、黑白际穴组大鼠脑干中ＩＬ－６ 含量显著降低，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：蒙医施灸赫依三穴可降低**大鼠脑干中ＩＬ－６含量，从而使大脑兴奋性降低，其机制可能与调节**大鼠脑干中ＩＬ－６含量相关。

关键词：**；蒙医灸疗；行为学；白细胞介素－６

随着社会的发展、生活节奏的加快，**成为流行病之 一，其严重影响人们生活质量，可诱发诸多**。蒙医理论  认为**的病因分为外因和内因，外因系劳逸失调、思虑太 过、惊吓、失血等，内因系赫依琪素紊乱累及心脏白脉，大多属“赫依病”范畴。前期研究［１－２］已表明，施灸赫依三穴对**模型大鼠有**作用，可降低**神经系统中重要的神经递质———ＮＯ 与 ＮＯＳ的活性。白细胞介素－６（ＩＬ－６）是具有多种生物学功能的细胞因子，参与睡眠－ 觉醒过程，具有调控睡眠的作用［３］。笔者在前期研究的基础上观察施灸赫依三穴对**大鼠行为学变化及脑干内ＩＬ－６ 含量的影响，进一步探讨其****的作用机制。

１ 材料与试药

１．１   实验动物

实验动物选择健康雄性 ＳＤ 大鼠６０ 只，体重约（２００± １０）ｇ，全部大鼠均由沈阳实验动物中心 提供，合 格证号：

（ＳＸＳＫ（辽）２０１５－０００１）。

１．２   试剂与仪器

ＺＢ－２００疲劳转棒仪（北京智鼠多宝生物科技有限责任公司）；ＡＵＷ１２０Ｄ 型岛津电子天平（日本岛津）；定位航行试验水槽（北京智鼠多宝生物科技有限责任公司）；Ｂｉｏｔｅｋ Ｅｌｘ８００酶标仪（美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司）；对氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）（  北京环亚太克生物医学技术有限公司）；艾灸贴（苏州东方艾绒厂）；ＩＬ－６酶联**分析（ＥＬＩＳＡ）试剂盒（广州瑞博奥生物科技有限公司）。

２ 方 法

２．１   造模方法

本实验采用公认的对氯苯丙氨酸（ＰＣＰＡ）造模法制备**大鼠模型［４］。将 ＰＣＰＡ 用生理盐水配制成混悬液（ ４５ｍｇ／１００ｇ），除正常组外，其余组大鼠腹腔注射 ＰＣＰＡ 混悬液（１ｍｇ／１００ｇ），每天１次，连续注射２天。大鼠出现活动明显频繁，对外界的声、光等刺激异常敏感，兴奋性增高，昼伏夜出节律消失等，表明造模成功。

２．２   分组及处理方法

将６０只ＳＤ 雄性大鼠随机分为６ 组，即正常组、模型组、安定组、顶会穴组、赫依穴组、黑白际穴组，每组１０只。正常组：大鼠腹腔注射19%氯化钠溶液（１ｍＬ/ １００ｇ）

每日１次，连续注射２日；与**组相同的抓取、固定，不做任何**，连续７天。

模型组：造模成功后同灸疗组一样抓取，固定。安定组：造 模成功 后，采 用 安 定 （地 西 泮 ）注 射 液，０．９２ｍｇ／ｋｇ，每日１次，连续灌胃７天。顶会穴组：造模成功后施灸大鼠顶会穴，每日１ 次，连续７天。赫依穴组：造模成功后施灸大鼠赫依穴，每日１ 次，连续７天。黑白际穴组：造模成功后施灸大鼠黑白际穴，每日 １ 次，连续７天。

２．３   观察指标与检测方法

２．３．１转棒平衡实验［５］ 实验装置为单头固定的水平棒。先将疲劳转棒仪调整到训练状态，使各组大鼠适应，再将疲劳转棒仪调到２０ｒ／ｍｉｎ，当直棒转动时，将大鼠放在转棒上，记录大鼠在转棒上持续不落降的时间，每只大鼠重复测定３次，取平均值。

２．３．２  定位航行实验［６］ 实验时向水箱里加入自来水和适量牛奶，使液体与水箱颜色一致，水平面高于站台２ｃｍ，水温控制在（２４±２）℃。实验前将各组大鼠放入水箱内自由游泳，若１２０ｓ未找到站台，人为将其移至到站台上，使大鼠熟悉水箱内环境。测试时将大鼠沿水箱壁轻巧放入水池，记录大鼠找到站台的时间，若大鼠放入水中１２０ｓ内未找到站台，以１２０ｓ计。

２．３．３  大鼠脑干中ＩＬ－６ 含量测定［７］ 将６ 组大鼠快速断头处死，冰上迅速取大脑干称重，－８０℃ 冰箱保存待测。取１００ｍｇ组织加入５００μＬ 裂解液，冰上裂解３０ｍｉｎ，每５ｍｉｎ振荡１次，在冰上用高速分散切割机进行组织破碎，冷冻离心机离心，１３０００ｒｐｍ，２０ｍｉｎ，取上清液。采用 ＥＬＩＳＡ 法，按照ＩＬ－６试剂盒说明书的步骤，在酶标仪上的５４０～５９５ｎｍ波长范围内检测吸光度，其中５６２ｎｍ 波长为*佳测量光密度值，计算出ＩＬ－６含量。

２．４   统计学方法

所得数据录入ＳＰＳＳ１７０统计学软件，连续性计量资料以平方差（珚 ）表示，数据比较使用独立样本 检验。等级数据资料以百分比（％）表示，数据间比较采用卡方检验。Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义。

３ 结 果

３．１   各组大鼠转棒平衡实验结果比较

与正常组相比，模型组大鼠在转棒上维持时间缩短，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。与模型组比较，安定组、赫依穴组、顶会穴组和黑白际穴组大鼠在转棒上维持时间延长，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表１。