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反相 LC-选择合适的流动相溶剂你知咩?

用于反相 LC 的流动相可以是纯溶剂、混合溶剂的组合或含有缓冲液和添加剂的溶剂。流动相溶剂充当分析物通过固定相的载体，而不影响结果。实际上有数百种溶剂可供选择，这使得确定哪一种适合您的需求变得具有挑战性。
流动相溶剂特性
幸运的是，流动相溶剂的一些特性可以帮助您为反相 LC 分析选择合适的溶剂。这些特征包括：
1.溶剂纯度——在 LC 中选择作为流动相的溶剂应为 HPLC 或 MS 级，应进行过滤和超声处理，以确保 UV 光谱中的吸光度zui小且不含气泡。
2.溶剂粘度- 反相流动相应具有zui佳粘度，以帮助确保通过 HPLC 色谱柱固定相的zui佳线速度，从而提供更窄和更尖锐的峰，从而提高分析的整体灵敏度。
3.折光率——这是使用折光率检测器时的一个关键考虑因素。理想情况下，当使用 RI 检测器时，流动相和样品稀释剂应具有相似的折射率以避免出现负峰，换句话说，样品应在流动相中制备。
4.溶剂沸点- zui好选择沸点低的溶剂以提高回收率，特别是在 LC-MS 中，挥发性更强的溶剂将改善离子化，从而提高 MS 灵敏度。
5.无腐蚀性——流动相溶剂不得腐蚀流路中的 HPLC 管、泵阀、密封件和其他部件。
6.溶剂毒性– 确保溶剂无毒并且使用稳定版。
7.溶剂混溶性——选择与样品完全混溶的溶剂。分析物也必须可溶于其中。否则，您将在色谱柱入口筛板处遇到样品沉淀，从而产生高反压、基线问题、分析物的不太敏感的峰以及色谱图中的峰面积和峰形问题。
8.流动相透明度– 选择以检测波长传输的流动相。
9.洗脱强度——这是溶剂从固定相中洗脱目标分析物的能力。洗脱强度越高，溶剂越有效，选择性越好。流动相溶剂应具有zui佳和足够的洗脱强度，以实现对目标分析物的选择性。

考虑到这些特性，大多数色谱工作者首要选择的流动相溶剂是乙腈，因为它具有zui佳粘度、良好的 UV 透明度和足够的洗脱强度。
其他常见的溶剂包括甲醇，它的粘度比乙腈高（特别是与水混合时）和四氢呋喃，它具有高洗脱强度，但毒性更大并且存在**问题。甲基叔丁基醚可作为四氢呋喃的替代品。

选择流动相缓冲液和添加剂
除了选择流动相溶剂外，您还需要选择合适的缓冲液和/或其他添加剂。缓冲液用于控制流动相的 pH 值。酸性添加剂（pH 为 2 至 4）用于大多数制药应用，而碱性流动相（pH 大于 8）用于为碱性分析物实现更高的保留和改进的峰形。
简单的流动相是zui好的
为反相 LC选择更简单的流动相已成为常态。这背后的实用性是显而易见的，随着色谱柱固定相和色谱柱制造技术的进步以及极其灵敏、高分辨率仪器的可用性，减少了对缓冲液和其他添加剂的需求，而这些需求以前是提供良好色谱所必需的。
例如，传统上将乙腈与 95% 的水混合以通过确保两种流动相在粘度和表面张力方面相似来提高混合效率。然而，随着泵的改进和在线混合器的引入，这变得越来越不必要。
除此之外，随着使用具有线性梯度分布的更简单的溶剂，方法变得更加稳健，并且随着高分辨率 MS 技术的快速发展，它进一步减少了 LC 方法中对复杂流动相的需求。

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