二手液相谱图问题解决方法

（一）二手液相谱图峰拖尾的原因和解决方法

1、筛板阻塞：反冲色谱柱，更换进口筛板，更换色谱柱；

2、色谱柱塌陷：填充色谱柱；

3、干扰峰：使用更长的色谱柱，改变流动相或更换色谱柱；

4、流动相PH选择错误：调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰；

5、样品与填料表面的溶化点发生反应图：加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂，更改色谱柱。

（二）二手液相谱图峰前延的原因和解决方法

1、柱温低：升高柱温；

2、样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂；

3、样品过载：降低样品含量；

4、色谱柱损坏：反冲色谱柱，填充色谱柱。

（三）二手液相谱图峰分叉的原因和解决方法

1、保护柱或分析柱污染图：取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相：改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂.

（四）二手液相谱图峰变形的原因和解决方法

样品过载：减少样品载量

（五）二手液相谱图早出的峰变形的原因和解决方法

样品溶剂选择不恰当：减少进样体积，运用低极性样品溶剂。

（六）二手液相谱图早出的峰拖尾程度大于晚出的峰的原因和解决方法

柱外效应：调整系统连接（使用更短、内径更小的管路），使用小体积的流通池。

（七）二手液相谱图K‘增加时，脱尾更严重的原因和解决方法

1、二级保留效应，反相模式：加入三乙胺（或碱性样品），加入乙酸（或酸性样品），加入盐或缓冲剂（或离子化样品），更换一支柱子；

2、二级保留效应，正相模式：加入三乙胺（或碱性样品），加入乙酸（或酸性样品），加入水（或多官能团化合物），试用另一种方法；

3、二级保留效应，离子对：加入三乙胺（或碱性样品）。

（八）二手液相谱图酸性或碱性化合物的峰拖尾的原因和解决方法

缓冲不合适：使用浓度50-100mM的缓冲液，使用Pka等于流动相PH值的缓冲液。

（九）二手液相谱图额外的峰的原因和解决方法

1、样品中有其他组份：正常；

2、前一次进样的洗脱峰：增加运行时间或梯度斜率，提高流速；

3、空位或鬼峰：检查流动相是否纯净，使用流动相作为样品溶剂，减少进样体积。

（十）二手液相谱图保留时间波动的原因和解决方法

1、温控不当：调好柱温；

2、流动相组分变化：防止变化（蒸发、反应等）；

3、色谱柱没有平衡：在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

（十一）二手液相谱图保留时间不断变化的原因和解决方法

1、流速变化：重新设定流速；

2、泵中有气泡：从泵中除去气泡；

3、流动相选择不恰当：更换合适的流动相；选择合适的混合流动相。