TEV Protease (**蚀纹病毒蛋白酶;Tobacco etch virus protease) 是来源于**蚀纹病毒(TEV) Nla的重组蛋白酶,此蛋白酶被用来切除纯化后融合蛋白的亲和标签。TEV蛋白酶具有很强的位点特异性,能够识别EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu- Tyr-Phe- Gln-Gly),*普通的是ENLYFQG,其切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸或丝氨酸之间。该酶在PH 5.5-8.5和4-30℃的广泛范围内皆有活性,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而修改。该酶带有His-sumo Tag经6×His标签纯化,剪切反应完毕后可通过Ni-NTA(产品货号:PAN001)去除。本蛋白酶来源于大肠杆菌重组表达。
在1X TEV Buffer (50 mM Tris-HCl, pH8.0, 0.5 mMEDTA, 1mM DTT) 中,30℃条件下反应 1 小时,能够切割 3 µg 的反应底物达 85%以上所需的酶量定义为一个活性单位。
待测融合蛋白100µg,加入TEV protease 2µl,4℃反应 16 小时,取酶切前后样品SDS-PAGE检测,如右图所示 >90% 融合蛋白被切割。
长期储存于-80℃,可保存 2 年;或小量分装后保存于-20℃,可保存6 个月,避免反复冻融。10X TEV Buffer 置于-20℃保存。