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布病的检测方法

布病的检测方法
虎红平板凝集试验（RBPT）：
实验原理：该试验又称为板式孟加拉红平板凝集实验。由于所用的抗原是酸性（PH3.6—3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。器材与试剂：虎红平板凝集抗原、载玻片、移液器、枪头
方法：在载玻片上加抗原30μl，加入30μl被检血清，混匀。在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。
试管凝集试验（SAT）：
实验原理：布鲁氏菌侵入机体后，会刺激机体产生特异性抗体，这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合，在电介质作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。
器材与试剂：布病试管凝集抗原、生理盐水、试管、移液管、移液器、小烧杯、枪头、试管架
方法：1.准备试管：取9支试管放在试管架中编号。1号管为血清对照管，2—8号为试验管，9号为抗原对照管。
2.血清稀释：1号管加入2.3ml生理盐水，2号不加，3号—9号各加入0.5ml生理盐水。1号管加入0.2ml被检血清，混匀后各吸0.5ml加入2、3号管。从3号开始做倍比稀释，8号吸0.5ml弃去。
3.加入抗原：10倍稀释抗原（用烧杯，1ml抗原9ml生理盐水），从2号开始每支加0.5ml稀释后抗原，从2号开始，血清被稀释浓度为1：25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600
4.凝集试验标准比浊管的配制（判定透明程度的依据）：取5支试管，编号，取稀释后的抗原再做2倍稀释。
管号抗原稀释液盐水(ml) 清亮度标记
(ml)
1 0.00 1.00 100% ++++ 2 0.25 0.75 75% +++ 3 0.50 0.50 50% ++
4 0.75 0.25 25% +
5 1.00 0.00 0% —

充分混匀，将所有试管放入温箱中37℃培养20—22小时取出，在室温下放置1—2小时后观察结果。
5.结果判定：1号管清亮透明，9号管均匀浑浊（对比）
假如试验管包括6号之前都透明，取出6号管比较，若其与2号比较管相近，则被检血清结果为1:400，+++
牛血清凝集价在1:100以上时，该血清样品为布病阳性，血清凝集价在1:50时，该血清样品为疑似反应，经3—4周后须再做一次检查，扔为疑似反应者判为阳性，凝集价在1:50以下则为阴性反应。
羊和猪血清在1:25凝集为可疑，在1:50或以上凝集为阳性。
总结：RBPT在使用时操作方便、快捷，适用于大规模的筛选检疫，但易出现假阳性。SAT特异性高，检测比较准确，但操作麻烦，费时费力，不适用于大规模的筛选检测，不能区分人工**和自然感染。先用RBPT筛选，阳性样品再用SAT复核以做出比较准确的判断。

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