动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法
一、实验目的
本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
氯霉素(CAS:56-75-7)。
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS检测及确证。
四、参考标准
《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》。
五、实验材料
SimplyGreen C18固相萃取柱1000mg/6mL(Cat.No.)。
六、实验方法
1、样品提取
将称取5 g猪肉试样，精确到0.01 g。置于50 mL离心管中，加入5 mL水，于涡旋混合器上快速混合1 min，使试样完全溶解。准确加入15mL乙酸乙酯，在振荡器上振荡10 min，以3000r/min离心10 min，准确吸取上层乙酸乙酯12 mL转入15 mL的离心管中，置于浓缩吹氮仪在45 ℃吹扫蒸干，加入5 mL水溶解，待净化。
2、SPE柱净化
(1)活化：依次采用5 mL甲醇、5 mL水活化C18固相萃取柱。
(2)净化：将提取液过C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3 mL水过柱，然后再用5 mL乙腈:水(2:8, v/v)淋洗柱，弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干10 min。
(3)洗脱：用6 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于10 mL离心管中，于45℃用氮气吹干液吹干，用乙腈:水(2:8, v/v)定容至1 mL，供LC-MS/MS上机测定。
3、LC-MS/MS条件
色谱柱：Venusil ASB C18(2.1×150mm，5 µm)
质谱仪：API 4000
流动相：A:10 mmol/L乙酸铵溶液 B: 甲醇
流速：0.2 mL/min
柱温：40 ℃
进样体积:5 µL
离子源：电喷雾(ESI)，负离子模式
检测方式：多反应监测(MRM)
表1 质谱仪离子源参数
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Source/Gas |
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Collision Gas(CAD) |
6 |
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Curtain Gas(CUR) |
30 |
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Ion Source Gas 1(GS 1) |
50 |
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Ion Source Gas 2(GS 2) |
50 |
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Ion Spray Voltage(IS) |
-4500 |
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Temperature(TEM) |
550 |
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Interface Heater(ihe) |
On |
表2 氯霉素及内标的母离子和子离子参数表
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保留时间 |
保留时间（min） |
检测离子对 |
DP |
EP |
CE |
CXP |
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氯霉素 |
4.90 |
320.9/151.9 |
-60 |
-10 |
-25 |
-12 |
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320.9/256.9 |
-60 |
-10 |
-25 |
-12 |
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氯霉素-D5 |
4.90 |
326.1/157.0 |
-60 |
-10 |
-25 |
-12 |
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七、实验结果 |
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1、2µg/kg猪肉基质氯霉素添加回收结果 |
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表3 2µg/kg猪肉基质氯霉素添加回收结果
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2、添加水平为2µg/kg猪肉基质中氯霉素检测色谱图
图1 氯霉素及内标氯霉素-D5总离子流图 图2 氯霉素(CAP )(320.9/151.9)质谱图
图3氯霉素-D5(CAP-D5)(326.1/157.0)质谱图
