Waters Styragel色谱柱的组安装
Waters Styragel色谱柱的组安装
本章包括：
■ GPC/HPLC系统准备
■ 色谱柱安装
■ 维修损坏的压力螺钉组件
■ 色谱柱平衡
a. GPC/HPLC系统准备
将色谱柱连接到GPC/HPLC系统的流路之前，必须预先调试好系统：
1. 通过用零死体积接头替换旧色谱柱，直接将系统进样器连接到检测器。
2. 将系统切换至用于保存色谱柱的溶剂。对于新的色谱柱组，该溶剂为出厂溶剂。
3. 冲洗系统以除去所有微粒和旧的溶剂。依应用需求冲洗进样器定量环。
谱带展宽
所有色谱系统中的连接管路和接头都会导致柱外谱带展宽。安装色谱柱之前，必须确定系统的仪器谱带展宽（参见测试仪器谱带展宽部分）。如果此项测试不适用于您的系统，请参阅系统操作员手册。
用于4.6 mm节约溶剂色谱柱的窄内径色谱系统窄内径系统的峰体积非常小，这对于谱带展宽最小化至关重要。所有连接都尽可能采用最短的管路。无需在检测器中使用微内径流通池或以任何方式更改您的传统HPLC系统。整个系统中须采用0.009英寸（0.25 mm）内径的管路。
b.色谱柱安装
串联色谱柱时，使用色谱柱各自随附的0.009英寸0.25 mm内径的U形色谱柱连接管。
色谱柱排列连接顺序一般情况下，分析结果与色谱柱组的排列顺序无关。但是，为了提高分离度并延长色谱柱寿命，请按照孔径依次减小的顺序排列色谱柱，推荐的接法是使孔径最大的色谱柱最靠近进样器。原因在于：
■ 孔径越大的色谱柱越稳定且越能够耐受外来物质的积累。
■ 样品中分子量最大的物质对样品的粘度影响最大。如果先分离分子量最大的物质，那么粘度的下降速度会更快，色谱柱组的压力将会更小。对于超高分子量的聚合物，这种分离顺序有利于减小样品的剪切效应。
色谱柱组安装
色谱柱的安装方法：
1. 从每根色谱柱上取下柱端塞，并将柱端塞妥善保存。
2. 将第一根色谱柱连接至进样器出口管道。确保溶剂流向与色谱柱标签上箭头所示的方向一致。用手指拧紧接头，然后用扳手将接头再拧1/4圈。
3. 利用色谱柱随附的U形管将下一根色谱柱连接到前一根色谱柱上。确保溶剂流向与色谱柱标签上箭头所示的方向一致。先用手指旋紧U形管的入口和出口接头，然后用扳手将接头再拧紧一圈。
4. 重复步骤3，直至连接好所有色谱柱。
5. 按照步骤1至4所述，将最后一根色谱柱连接到检测器入口。
c.维修损坏的压力螺钉组件
损坏的压力螺钉或磨损的锥箍组件的卸载方法：
1. 利用截管器或带刀刃的锉刀在所选断点处对管件进行标记。
2. 利用覆有织物的钳子夹住管件两侧标记处（以防损坏管件表面）。轻轻地来回弯折管件使其在标记处断开。必须确保管件末端笔直、开口且无毛刺。
3. 依次将压力螺钉和锥箍（锥体较大的末端朝前）套到管件上。妥善地将管件底部放入接头座中。如果管件未完全落定，则产生的死体积将导致色谱结果变差。
不同类型的色谱柱，锥箍末端与U形管末端之间的距离可能不同。如果您使用的色谱柱来自另一家制造商，可能需要重置锥箍或添加新的接头（见图1）。进样器与检测器之间的所有管线均使用0.009英寸（0.25 mm）内径的管件。对于沃特世色谱柱而言，临界距离为0.130英寸（2.25 mm）。
d.色谱柱组平衡
色谱柱安装之后，或存放一段时间后重新使用时，需要对色谱柱进行平衡。平衡色谱柱组的方法：
1. 将泵流速设置为0.0 mL/min，然后打开泵。
2. 每隔15秒将流速增加0.1 mL/min，直至达到最终流速。
3. 用出厂溶剂冲洗色谱柱直至基线稳定。
4.6 mm溶剂节约型色谱柱的流速和反压为获得最佳的分离度和最长的色谱柱寿命，请保证各色谱柱的流速不超过0.3 mL/min或反压不超过3.5 MPa（500 psi，35 atm）。
请注意：色谱柱随附的《分析证书》中标有推荐流速，但可能高于最（zui）优值。为在实验室中获得最长的色谱柱寿命，请遵照我们提供的流速和反压条件。
使用HR 0.5、HR 1和HR 2色谱柱时，须每隔30秒将流速增加0.1 mL/min，直至达到0.3mL/min。
缺损的色谱柱
若串联色谱柱中一根或多根有缺损，则可能导致整组色谱柱存在缺陷。一根有缺损的色谱柱可能引起谱峰展宽，而这种影响是其它良好的色谱柱所无法弥补的。相关柱效测试条件请参见表4、表5或表6。
初始效率测试
在首（shou）次分析之前需要对系统和色谱柱进行测试。使用推荐的系统和色谱柱参数运行测试样品并记录结果。这些结果可为之后的性能测试提供比较的基准。有关测定系统和色谱柱效率的步骤，请参阅关于效率测试的部分。
保存这些测试得到的色谱图。记录柱效测试的保留时间、系统设置以及所有的实验条件，以便将来进行比较时能准确重现。
