Waters Styragel色谱柱的溶剂和样品制备

Waters Styragel色谱柱的溶剂和样品制备

本章介绍了：

■ 溶剂预备

■ 溶剂更换

■ 将色谱柱转换至高温溶剂

■ 样品制备

a. 溶剂预备

使用清洁的溶剂以获得可重现的结果，同时可免去维护操作。使用LC级或更高（gao）级别的溶剂，并过滤除去大于0.45 μm的微粒物质。想获得过滤器选择和溶剂相容性一览表，请参阅沃特世耗材指南的过滤器相关章节。

b. 更换溶剂

溶剂相溶性

Waters Styragel色谱柱的出厂溶剂可由您自选：甲苯、THF或DMF。某些应用要求采用其它溶剂。溶剂转换时选择相溶的溶剂能得到最佳效果。请参阅下表了解相溶性溶剂。

对于高温色谱，要在三氯苯（TCB）或邻二氯苯（ODCB）等溶剂条件下使用Waters Styragel色谱柱，必须将色谱柱转换至高温下所选溶剂。

高温转换步骤

将色谱柱组转换至高温操作的方法：

1. 在室温下将系统转换至色谱柱出厂溶剂。

2. 以0.1 mL/min的流速冲洗节约溶剂型色谱柱，同时在至少3小时内逐渐将温度升至90 ℃。

溶剂节约型色谱柱（以0.1 mL/min的流速冲洗色谱柱，同时在至少3小时内逐渐将温度升至90 ℃。）

色谱柱由THF转换为HFIP或Y-丁内酯时，将系统设置为55 ℃。

3. 在系统处于90 ℃时，以0.1 mL/min流速将其转换至高温溶剂，每根色谱柱使用12 mL溶剂。然后以0.2 mL/min流速、至少四倍柱体积的溶剂冲洗系统。

使用色谱柱组时，溶剂用量为上述步骤中指定的色谱柱体积乘以使用的色谱柱数目。

4. 以0.1 mL/min的流速转换至高温溶剂。每根色谱柱使用至少20 mL溶剂。

5. 在至少4小时内将温度升至最终条件，同时继续以0.1 mL/min的流速冲洗色谱柱。温度不得超过150 ℃。

在至少4小时内将温度升至最终条件，同时继续以0.1 mL/min的流速冲洗色谱柱。温度不得超过150 ℃。

6. 将流速调节为最终操作条件。最佳流速为0.3 mL/min。

将流速调节为最终操作条件。最佳流速为0.3 mL/min。

返回至室温

反向执行上述步骤可使色谱柱返回至室温。或者，将流速设置为0.1 mL/min，并使温度每30分钟降低10 ℃。

重启色谱柱

要重启色谱柱，将流速维持在0.1 mL/min，并在10小时内将温度升至所需温度。然后设置所需的操作流速。

为获得最长的色谱柱寿命，应避免温度循环变化。色谱柱未使用时，应维持在运行温度，并将流速降低至0.1 mL/min。

c. 样品制备

良好的样品前处理能够延长色谱柱寿命并确保获得可重现的结果。制备样品时应将色谱柱容量、样品粘度、检测器类型和灵敏度等因素考虑在内。采用0.45 μm过滤器除去微粒。参阅沃特世耗材指南过滤器相关章节，获得过滤器选择和溶剂相容性信息。

活性聚合物

某些活性聚合物（例如环氧聚合物）能“活化”色谱柱。特定类别的活性聚合物能够延长色谱柱寿命并提高重现性。

样品浓度

样品浓度对粘度和进样体积均有影响。较小的样品量能够得到较窄的色谱峰，但对于粘性样品可能需要更多用量且稀释度更高。表2列出了为获得最佳结果的推荐样品浓度。

高分子量聚合物

高分子量聚合物尤其容易产生粘度问题。分析高分子量聚合物时，请使用表2所列的浓度。运行窄分布聚合物（例如聚苯乙烯标准品）时，每根色谱柱的进样体积为50 μL（对于溶剂高效色谱柱，每根色谱柱的进样体积为20 μL），样品浓度为0.02%。

由于溶液剪切作用，分子量为四百万甚至更高的聚苯乙烯标准品极易发生降解。剪切效应表现为分子量分布宽于预期值。操作得当时，可以成功处理分子量高达2000万的聚合物。

超高分子量聚合物

剪切效应也是大多数超高分子量聚合物所应当考虑的因素。这些聚合物的剪切效应可能不如窄分子量标准品的剪切效应那样容易观察。超高分子量的聚烯烃馏分易发生剪切和初始沉淀现象。对于这些馏分，采用极稀的溶液（例如，0.02%）能够最大限度减少沉淀现象。