Symmetry色谱柱的安装、平衡和初始柱效测试
随着当今化学家不断为新型药物和生物制药产品开发出新的分析方法，选择重现性优良的HPLC色谱柱变得至关重要。选用的色谱柱应能在新型药品的整个生命周期内得到一致的色谱结果。Symmetry、SymmetryShield™和Symmetry300™色谱柱优异的重现性是沃特世在HPLC色谱柱领域不断改进，精益求精的成果。
每根Symmetry色谱柱都附带一份COA报告(Certificate of Analysis)和一份性能测试色谱图。COA报告为Symmetry色谱柱中所用的填料批次所特有，包括凝胶批号、未键合颗粒和键合填料分析结果，以及色谱结果和检测条件。性能测试色谱图则会提供每根色谱柱的以下信息：凝胶批号、色谱柱序列号、USP理论塔板数、USP拖尾因子、容量因子以及色谱条件。
这些数据应妥善保存，以备将来参考。
a. 色谱柱安装
注：下述步骤中给出的流速适用于典型的4.6 mm内径色谱柱。可根据所安装Symmetry色谱柱的柱内径、柱长、粒径和柱压相应地提高或降低流速。色谱柱内径和/或柱长改变时，请参阅“放大/缩小等度分离方法”部分计算流速。有关HPLC连接的详细信息，请参阅“将色谱柱连接到HPLC”部分。
1. 灌注泵系统，排出含缓冲液的流动相，然后将色谱柱的入口端连接至进样器出口。
2. 用100%有机流动相（甲醇或乙腈）冲洗色谱柱，泵流速设置为0.1 mL/min，并在5 min内增加至1 mL/min。
3. 当流动相可从色谱柱出口自由流出时，停止液流并将色谱柱出口连接至检测器。这样可以防止空气进入检测系统，使系统更快达到基线平衡。
4. 按照步骤2所述逐渐增加流速。
5. 一旦柱压和基线达到稳定状态，即可继续进行下一部分操作。
b. 色谱柱平衡
Symmetry色谱柱出厂时用100%乙腈保存。在更换为其他流动相体系之前，务必确保流动相的兼容性。请用至少10倍柱体积的流动相平衡色谱柱（请参阅表1中的空色谱柱体积）。为避免流动相缓冲液在色谱柱或系统中发生沉淀，请使用5倍柱体积的水/有机溶剂混合物冲洗色谱柱，其中有机溶剂比例应与所需缓冲流动相中的有机溶剂比例相同或更低。（例如，使用60%甲醇水溶液冲洗色谱柱和HPLC系统，然后再引入60%甲醇/40%缓冲液组成的流动相）。
注：如果流动相中含有低浓度添加剂（例如离子对试剂），那么完成平衡可能需要100-200倍柱体积的流动相。此外，当流动相中含有甲酸盐时（如甲酸铵、甲酸等），初始柱平衡时间也可能较长。
c. 初始柱效测定
1. 使用色谱柱之前，需要先进行一次柱效测试。沃特世建议您在收到色谱柱后使用合适的溶质混合物（例如“性能测试色谱图”中给出的溶质混合物）对色谱柱进行测试。
2. 测定理论塔板数(N)，并定期对比该数值。
3. 按预定的时间间隔进行重复测试，跟踪色谱柱性能随时间的变化情况。采用两套不同的HPLC系统进行测试时，所得柱效结果可能会有微小差异，这可能是由于连接质量、运行环
境、系统电子设备、试剂质量、色谱柱条件和操作员技术等因素所致。
