PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子（universal primers） 进行扩增反应；比较常用的引子包括SP6, T3 与T7 promoter primer, M13/pUCforward与reverse primers等；若有特殊考量，也可以使用序列专一性核酸引子对。进行PCR反应时若同时添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP,所增殖的DNA即被32P或DIG所标定，所以PCR是制备核酸探针非常便捷好用的方法。 仪器用具：微量离心机；PCR 反应器 药品试剂： 模版DNA: pBlueGus 质体DNA （~50 pg） 核酸引子对： T3 promoter primer 与T7 promoter primer （各2 μM） 矿物油 （是否需要视PCR反应器机型而定） PCR DIG probe synthesis kit （Roche）， 内含： Taq DNA polymerase （Expand High Fidelity, 3.5 U/μL） 10×PCR DIG probe synthesis mix （2 mM dATP, dCTP, dGTP, 1.9 mM dTTP,及0.1 mM DIG-11-dUTP, pH 7.0） Expand high fidelity buffer with MgCl2 （10×） 方法步骤： 以下反应条件主要参照PCR DIG probe synthesis kit 制造厂商所的产品说明。 1） 取一支0.5 mL微量离心管，依下表逐一加入各项试剂 （单位 μL）： 2） 以手指头轻弹管壁使各项试剂混合均匀。 3） 短暂离心后，徐徐加入100 μL 矿物油。 ◆ 有些PCR 反应器不需使用矿物油。 4） 在PCR 反应器上设定PCR 反应条件：Denaturation: 94℃/10 min 扩增反应： 30 循环的 [94℃/45 s → 55℃/1 min → 72℃/2 min] 后的elongation step:72℃/10 min 5） 将微量离心管移至反应器上，并开始进行PCR 反应。 6） 反应完成后，以微量移液器吸出矿物油，并取出5 μL PCR 反应产物，进行洋菜胶体电泳分析。 华东生物器材网（www.jp1718.com）是上海金鹏旗下网站。本网是专业的生化器材网站，集生产、制造、销售于一体。优势产品有紫外分析仪、核酸蛋白检测仪、凝胶成像分析系统、低压液相色谱分离仪、自动部分收集器、梯度混合器、旋转蒸发器等生物仪器，是销售生化器材品种**，规模庞大的专业企业。 上海金鹏分析仪器有限公司 www.jp1718.com 电话： 61425398 36162366 手机： QQ:964122960，765695826， 842727501， 2460311703， 2431022418，170324176 传真： 地址：上海市真陈路1398弄15号 邮编：200444