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IPTG 诱导菌株表达外源基因的原理

发布时间:2014-04-18
 
    IPTG是一种诱导外源基因表达的诱导剂,它不仅仅如我们学过的作为乳糖的类似物诱导大肠杆菌表达半乳糖苷酶,它是一种普遍应用的诱导剂,能诱导菌种表达多种外源基因。
    但是它能诱导基因表达的具体原理我却了解的不是很多,我在网上查到以下一些内容,供查阅者借鉴。
 
    *早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵 子,乳糖的类似物IPTG可以和lacI产物结合, 使其构象改变离开lacO,从而激活转录.
    这种可诱导的转录调控成为了大肠杆菌表 达系统载体构建的常用元件。tac启动子是 trp启动子和lacUV5的拼接杂合启动子,且 转录水平更高,比lacUV5更优越。trc启动 子是trp启动子和lac启动子的拼合启动子 ,同样具有比trp更高的转录效率和受lacI 阻遏蛋白调控的强启动子特性。在常规的 大肠杆菌中,lacI阻遏蛋白表达量不高, 仅能满足细胞自身的lac操纵子,无法应付 多拷贝的质粒的需求,导致非诱导条件下 较高的本底表达,为了让表达系统严谨调 控产物表达,能过量表达lacI阻遏蛋白的 lacIq 突变菌株常被选为Lac/Tac/trc表达 系统的表达菌株。现在的Lac/Tac/trc载体 上通常还带有lacIq 基因,以表达更多 lacI阻遏蛋白实现严谨的诱导调控。IPTG 广泛用于诱导表达系统,但是IPTG有一定 毒性,有人认为在制备医疗目的的重组蛋 白并不合适,因而也有用乳糖代替IPTG作 为诱导物的研究。另外一种研究方向是用 lacI的温度敏感突变体,30度下抑制转录 ,42度开发。热诱导不用添加外来的诱导 物,成本低,但是由于发酵过程中加热升 温比较慢而影响诱导效果,而且热诱导本 身会导致大肠杆菌的热休克蛋白激活,一 些蛋白酶会影响产物稳定.
    
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