比JC-1更利于监测活细胞中线粒体膜电位变化的荧光探针

线粒体膜电位是细胞健康和线粒体通透性转换的关键指标，是诱导细胞凋亡的重要步骤。百萤生物为您推荐AAT研发的JC-10荧光探针，它是大家熟悉的JC-1的升级、替代产品。

 JC-1是一种亲脂性阳离子染料，广泛用于检测线粒体去极化。 然而，其极差的水溶性使其即使在1μM浓度下也在水性缓冲液中沉淀。 这种不利的性质使得JC-1难以用于某些生物学应用，特别是对于基于图像和荧光酶标仪的应用，其中非常需要完全去除未溶解的荧光颗粒以获得准确的数据。

研发JC-10是为了改善JC-1的水溶性差。与JC-1相比，JC-10具有更好的水溶性。与JC-1的特性一致，JC-10能够选择性地进入线粒体，并且当膜电位增加时，其颜色可逆地从绿色变为橙色。这种性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成这导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）转变为570nm（即J聚集体的发射）。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。可以使用流式细胞仪，显微镜和酶标仪中常用的过滤器检测两种荧光颜色。对于流式细胞仪，可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了在流式细胞仪中的潜在用途外，JC-10还可用于荧光成像和荧光酶标仪平台，其中JC-1由于其水溶性差而未被广泛使用。

AAT相继研发了一种检测试剂盒，可以使用JC-10通过酶标仪（而不是流式细胞仪）监测线粒体膜电位。 JC-10在几种不同细胞类型（例如，原代大鼠肝细胞，CHO-K1，HeLa，Jurkat和HepG2细胞系）中优于JC-1。在荧光板酶标仪和荧光显微镜上进行各种数据的观察和检测。 在大多数细胞系中，JC-10具有优异的信号与背景比。

以下是JC-10在CHO-M1，Hela，HepG2和Jurkat细胞中的实验实例

JC-10是一种新型荧光探针，可用于以与JC-1相似的机制检测线粒体膜电位变化。 与JC-1相比，JC-10具有以下优点和特点：

易于使用：当稀释到水性缓冲液中时，JC-10不会沉淀，从而消除伪影。

稳定：JC 10具有较小的分析偏差，因为它具有更高的水溶性和更高的灵敏度。

信号强度高：在大多数测试细胞系中，JC-10具有比JC-1更高的信号背景比和更高的灵敏度。

广泛应用：JC-10可用于原代大鼠肝细胞。

适用仪器多样化：JC-10与荧光板酶标仪，细胞成像仪和流式细胞仪兼容。

图1.在JurKat细胞中由JC-10和JC-1监测的喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。 用10μM喜树碱处理Jurkat细胞4小时。 将JC-1和JC-10染料加载溶液加入孔中30分钟。 使用荧光显微镜（Olympus IX71）使用具有20X物镜的FITC和TRITC通道获得的图像。

图2.使用JC-10或JC-1的CHO-K1，Hela和HepG2细胞系中的FCCP剂量反应。 将CHO-K1，Hela和HepG2细胞在96孔黑壁/透明底板中以每100μl/孔30,000个细胞接种过夜。从平板中除去生长培养基，向每个孔中加入100μL10μM的JC-10或JC-1。 将细胞在37℃下染色30分钟。 FlexStation添加FCCP以达到*终指定浓度。

图3.使用JC-10或JC-1的Hela细胞中的FCCP，寡霉素和星形孢菌素剂量反应（终点测定）。 将Hela细胞在96孔黑壁/透明底板中以每100μl/孔20,000个细胞接种过夜。 细胞用50μL：A）FCCP处理30分钟，B）Olygomycin处理30分钟，和C）Staurosporine在血清饥饿18小时后处理5小时。 每孔加入50μL20μMJC-10或JC-1。 将细胞在37℃下染色30分钟。 FlexStation记录荧光信号。

图4.通过使用JC-10或JC-1在原代大鼠肝细胞中的FCCP或缬氨霉素剂量反应（动力学与终点测定）。 根据制造商的建议将原代大鼠肝细胞接种在96孔板上。 A）动力学测定：通过FlexStation添加FCCP以达到*终指示的浓度。 B）终点测定：用缬氨霉素处理细胞30分钟。 FlexStation记录荧光信号。 通过SoftMaxPro计算绿色和红色荧光强度的比率。

图5. JC-10和JC-1比较用于监测JOTKat细胞中喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。 用10μM喜树碱处理Jurkat细胞4小时。 将JC-1和JC-10染料加载溶液加入相应的孔中30分钟。 用BMG NOVOstar酶标仪在Ex 485nm / Em 520和595nm下测量J-聚集体和单体形式的JC-1和JC-10的荧光强度。

图6.使用JC-10对FCCP诱导的线粒体膜电位变化的影响的流式细胞术分析。 将Jurkat细胞与DMSO（上图）或5μMFCCP（低）一起用JC-10溶液染色加载10分钟。使用FL1和FL2通道，用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪测量J聚集体和单体形式JC-10的荧光强度。 未补偿数据（左栏）与补偿数据进行比较（右栏）

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