百萤教您选择正确的ROS探针,正确的选择让实验不再迷茫。活性氧(ROS)是化学反应性的含氧化学物质,其作为细胞代谢的副产物而产生。 在动物细胞中,ROS的产生通常发生在线粒体中。 在植物细胞中,ROS也可以在叶绿体中产生。 *近,已显示ROS在过氧化物酶体和各种细胞类型的质膜氧化酶中产生。
当过量产生时,ROS一直被认为会导致细胞大分子如DNA,脂质和蛋白质的损伤。 从整体上讲,这是由细胞的氧化应激状态表示的。 这种应激状态与细胞过程如细胞凋亡有关,而且在宏观上更像是在许多人类**的发病机制中发挥作用。
由于其具有破坏性的影响,细胞有几个精心调节的系统来管理过量的ROS。 *充分研究的系统是谷胱甘肽 - 抗坏血酸循环,其使用NADH和NADPH作为电子供体将H2O2**为H2O。 其他系统包括酶,例如超氧化物歧化酶,其催化超氧阴离子(O 2- )歧化成O 2或H 2 O 2,和过氧化氢酶,其催化H 2 O 2分解成H 2 O和O 2。
ROS对细胞的利与弊导致它们早已被广泛的研究了,但是*近研究已经研究了ROS在细胞信号传导中的作用。 在控制量方面,ROS已被证明可调节基因活化。 然而,出现这种情况的具体机制仍有争议。ROS可能与特殊受体结合,这些受体启动信号级联,导致基因调控。 ROS也可能通过调节蛋白质磷酸化直接修饰这种信号级联中的蛋白质。
既然ROS对细胞作用如此之大且类型繁多,那么如何才能正确的选择探针对ROS进行检测呢?
检测目标
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作用目标
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探针
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货号
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原理
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过氧化氢(H2O2)
许多酶促ROS**途径的产物。 *充分研究的是超氧化物歧化酶活性,其催化超氧阴离子还原为过氧化氢。
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活细胞
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DCFH-DA
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15204
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探针进入细胞,其中酯酶裂解双乙酸酯基团。 然后DCFH被过氧化氢氧化成DCF并在激发时发出绿色荧光。
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二氢罗丹明123
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15206/15207
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探针被动地渗透细胞膜。 通过过氧化氢氧化产生罗丹明123,其在激发时发出蓝色荧光。
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OxiVision™ Blue
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11504/11505
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探针渗透细胞并被细胞内过氧化氢氧化,激发时产生荧光
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OxiVision™ Green
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11503/11506
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细胞提取物
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Amplite™荧光过氧化氢检测试剂盒(红色)
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11501
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过氧化氢依赖氧化ADHP(同义词:10-乙酰基-3,7-二羟基吩恶嗪,Amplex®Red)通过辣根过氧化物酶(HRP)将ADHP转化为试卤灵。 可以使用比色法或荧光法检测试卤灵。
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Amplite™比色过氧化氢检测试剂盒
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11500
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Amplex™红色过氧化氢/过氧化物酶检测试剂盒
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/
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辣根过氧化物酶(HRP)对过氧化氢IR的过氧化氢依赖性氧化产生活化的探针。 激发会发出近红外荧光信号
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Amplite™荧光过氧化氢检测试剂盒(红外光)
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11502
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检测目标
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作用目标
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探针
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货号
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原理
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超氧阴离子(O2-)
有氧代谢的副产物,如线粒体呼吸(特别是复合物I和复合物III)
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活细胞/细胞提取物
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lucigenin(光泽精)
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21259
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通过转化为光泽精阳离子基团激活光泽精。 光泽精阳离子自由基与超氧阴离子反应生成二氧杂环丁烷中间体,其分解为N-甲基吖啶酮。 N-甲基吖啶酮中的高能电子降低能量状态,导致发光。
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Coelenterazine(腔肠素)
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21150
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超氧阴离子的氧化导致激发的电子态。 在衰变到基态电子配置时,光子作为发光释放。
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Luminol(鲁米诺)
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11050
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超氧化物依赖性酶催化鲁米诺的氧化导致发光。
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Hydroethidine(二氢乙锭)
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15200
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探针被动地渗透完整细胞并定位于线粒体中。 通过超氧化物氧化激活探针。 活化的探针与DNA嵌入,并在激发后发荧光。 DNA结合是强荧光信号所必需的。 对于氢化乙啶,活化的探针是乙锭(即与DNA染色溴化乙锭相同的活性物质)
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MitoSox™ Red
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/
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MitoROS™ 580
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16052/22970/22971
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MitoROS™ 520
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16060
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探针容易通过完整的细胞膜,然后定位在线粒体中。 然后通过超氧化物氧化。 激发后,它会释放出绿色荧光
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检测目标
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作用目标
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探针
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货号
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原理
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羟基(•OH)
当超氧阴离子与过渡金属反应时可以产生。 极度反应。 可以与DNA骨架上的氢反应,导致链断裂。
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活细胞/细胞提取物
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MitoROS™ OH580
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16055
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探针能够自由地进入活细胞,其中活细胞被游离羟基特异性氧化。 激发后,氧化的探针发出红色荧光。
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总ROS
包括过氧化氢,超氧阴离子,羟基自由基,单线态氧,一氧化氮,过氧化丁基和次氯酸
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活细胞/细胞提取物
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ROS™ Brite 570
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16000/22902
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探针被动地渗透完整的细胞膜。 一旦进入细胞内,探针就被细胞内的ROS氧化。 探针也可以在溶液中被ROS氧化,用于细胞提取物测定。 激发后,探针发出荧光信号。
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ROS™ Brite 670
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16002/22901
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ROS™ Brite 700
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16004/22903
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Amplite™ ROS Green
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22900
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