Tide Fluor和Tide Quencher染料选择指南
今天百萤总结了AAT Bioquest研发的Tide Fluor和Tide Quencher两类染料的特点、使用方法等，希望可以为还不知道如何选择这两类产品的小伙伴一些帮助。
什么是Tide Fluor、Tide Quencher染料?
Tide Fluor和Tide Quencher是一类磷酰胺染料和CPG载体，用于制备FRET寡核苷酸，它们是经典染料（如FAM、HEX、TET和JOE）和上等低聚标记染料的**替代品。AAT Bioquest的Tide Fluor 染料（如TF1，TF2，TF3，TF4，TF5，TF6，TF7和TF8）具有比典型的荧光团（如荧光素，罗丹明和花青素）更强的荧光性和更高的光稳定性。我们的TF2的激发和发射波长与羧基荧光素（FAM）的激发波长和发射波长基本相同，这使其易于用于荧光素的生物学应用，但TF2具有更强的性能。与FAM探针相比，TF2在生理条件下具有更强的荧光，并且光稳定性更高。相比荧光素和Cy染料（如AlexaFluor® 和Cy3，Cy5和Cy7），Tide Fluor 染料具有更高的成本效益。
图1.杂交诱导的分子信标寡核苷酸探针的荧光增强对比，该探针包含Tide Fluor 染料作为供体或Tide Quencher 染料作为受体。
除了杰出的Tide Fluor 供体染料外，Tide Quencher FRET受体染料（例如TQ1，TQ2，TQ3，TQ4，TQ5，TQ6和TQ7）经过优化，可与我们的Tide Fluor 染料和经典的荧光团（例如AMCA，EDANS，FAM，TAMRA，HEX，JOE，TET，ROX，Cy3，Cy5和Cy7）配对。与我们的Tide Fluor 供体染料一样，我们的Tide Quencher 受体染料与市场上其他同类产品相比，也具有更高的成本效益，可满足您所需的生物学应用。
为了方便研究，Tide Fluor 染料和Tide Quencher 染料拥有多种反应形式。对于寡核苷酸的合成标记，我们同时提供了Tide Fluor 和Tide Quencher 染料的亚磷酰胺及其CPG载体。对于寡核苷酸的后标记，我们提供氨基反应性和巯基反应性的Tide Fluor 和Tide Quencher 水溶性染料。
Tide Fluor与Tide Quencher特点
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Tide Fluor染料
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Tide Quencher染料
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经过优化，可与Tide Quencher 受体配对使用，以*大程度提高FRET电位
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较强的荧光强度可以增强检测灵敏度
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对pH不敏感和对环境不敏感的荧光，使检测更加方便简单
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更高的光稳定性，可提高荧光成像的质量
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多种反应形式可用于缀合物
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功能强大：能够探索其他淬灭剂可能无法达到的FRET电位。
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多种反应形式：方便自我构建所需的FRET生物分子
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匹配度高：与您所需的荧光供体完全匹配。
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性价比高：具有*佳的性能与便宜的价格。
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Tide Fluor与Tide Quencher系列产品选择指南
表1.Tide Fluor系列产品选择指南
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Tide Fluor 染料
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Ex(nm)
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Em(nm)
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主要应用功能*
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Tide Fluor 1（TF1）
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341
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447
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TF1被设计为EDANS荧光团的优良替代品，具有以下特征：
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Tide Fluor 2（TF2）
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499
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522
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TF2被设计为荧光素（FAM和FITC）的优良替代品，具有以下特征：
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在pH7时荧光强度更强
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对pH敏感的荧光更少
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光稳定性更高
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Tide Fluor 3（TF3）
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560
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580
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TF3被设计为Cy3荧光团的优良替代品，具有以下特征：
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Tide Fluor 4（TF4）
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588
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610
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TF4被设计为ROX和Texas Red荧光团的优良替代品，其具有以下特征：
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Tide Fluor 5（TF5）
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649
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664
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TF5被设计为Cy5荧光团的优良替代品，具有以下功能：
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Tide Fluor 6（TF6）
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676
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695
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TF6被设计为Cy5.5荧光团的优良替代品，具有以下功能：
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Tide Fluor 7 (TF7)
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749
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775
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TF7被设计为Cy7荧光团的优良替代品，具有以下功能：
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Tide Fluor 8 (TF8)
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775
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807
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TF8是AAT Bioquest目前提供的*长波长的Tide Fluor 染料。其缀合物可用于基于NIR荧光探针的体内成像分析。
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表2.Tide Quencher系列产品选择指南
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Tide Quencher染料
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吸收(nm)
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主要应用功能*
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Tide Quencher 1（TQ1）
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〜490
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TQ1被设计为DABCYL优良淬灭剂的替代品，具有以下特征：
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吸收更强
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更高的淬灭效率
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具有所需溶解度的多功能反应形式
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Tide Quencher 2（TQ2）
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~520
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TQ2被设计为FAM，HEX，TET，JOE，TF2和罗丹明6G的优良淬灭剂，具有以下特征：
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吸收更强
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更高的淬灭效率
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具有所需溶解度的多种反应形式
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Tide Quencher 3 (TQ3)
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~570
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TQ3被设计为TAMRA，TF3和Cy3的优良淬灭剂，具有以下特征：
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吸收更强
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多种反应形式
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Tide Quencher 4 (TQ4)
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〜600
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TQ4被设计为ROX、TF和Texas Red的优良淬灭剂，具有以下特点：
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吸收更强
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更高的淬灭效率
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具有所需溶解度的多种反应形式
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Tide Quencher 5(TQ5)
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~660
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TQ5被设计为Cy5和TF5的优良淬灭剂，具有以下特征：
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吸收更强
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多种反应形式
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Tide Quencher 6 (TQ6)
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~700
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TQ6被设计为Cy5.5和TF6的优良淬灭剂，具有以下功能：
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吸收更强
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更高的淬灭效率
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具有所需溶解度的多种反应形式
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Tide Quencher 7（TQ7）
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~760
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TQ7被设计为Cy7和TF7的优良淬灭剂，具有以下功能：
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吸收更强
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更高的淬火效率
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具有所需溶解度的多种反应形式
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选择FRET的供体和受体
供体分子和受体分子的选择可以相同，也可以不同。在大多数应用中，它们是不同的染料。FRET既可以通过受体敏化荧光的出现，也可以通过供体/受体的强度比变化（如果受体是荧光的）或供体荧光强度的降低来检测。在后一种情况下，受体可以是荧光的或非荧光的。各种D/A对的Ro值可以明确的看出FRET的效率，FRET对的Ro值越大，FRET效率越高。荧光素/四甲基罗丹明对已被广泛地用于开发FRET的分析。EDANS/DABCYL对已被广泛用于开发FRET的核酸探针和蛋白酶底物。MCA（7-甲氧基香豆素-4-乙酸）和DNP（2，4-二硝基苯胺）是开发荧光探针的另一对供体/受体。与EDANS/DABCYL对相比，MCA/DNP对的荧光信号波长通常较短且较弱。然而，由于波长较小，MCA/DNP对往往表现出更好的亲和力。DNP也是一种很好的FRET受体，与色氨酸（Trp）、2-氨基苯甲酸（Abz）或Abz衍生物（如Abz（N-Me））配对。
表3.一些D/A对的Ro值
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供体
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受体
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Ro(Å)
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荧光素 Fluorescein
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四甲基罗丹明 Tetramethylrhodamine
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49-56
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IAEDANS
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FITC
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49
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IAEDANS
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5-（碘乙酰胺基）荧光素 5-(Iodoacetamido)fluorescein
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49
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荧光素 Fluorescein
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荧光素 Fluorescein
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44
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EDANS
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DABCYL
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33
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色氨酸 Tryptophan
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IAEDANS
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22
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色氨酸 Tryptophan
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磺酰 Dansyl
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21-24
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色氨酸 Tryptophan
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Pyrene
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28
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磺酰 Dansyl
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荧光素 Fluorescein
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33-41
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奈 Naphthalene
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磺酰 Dansyl
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22
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芘 Pyrene
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香豆素 Coumarin
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39
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B-藻红蛋白 B-Phycoerythrin
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Cy5
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79
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表4.Tide Quencher 染料FRET应用推荐
注.建议使用绿色标记的FRET对，用青色标记的对可以使用，但效率不如绿色对标记。我们已经验证，这些推荐的FRET对在我们的蛋白酶和核酸检测分析中已表现出高灵敏度和低背景。除FRET效率外，还需要考虑其他因素，例如pH，多路复用和缓冲液干扰等。
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