化学词典告诉你鬼笔环肽的配置以及注意事项。
鬼笔环肽(phalloidin 鬼笔鹅膏素),从一种毒性菇类中分离的剧毒生物碱,C35H48N8O11S。无色,细针状结晶,系从毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中得到的有毒的环状七肽。
鬼笔环肽的配制
0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇(也可用DMSO或无水乙醇溶解)配成贮存液,可在-20度避光的条件下长期保存,工作液的浓度为5ug/ml,由贮存液加生理盐水PBS稀释20倍即可。
染色程序:
生理盐水PBS清洗细胞2次,每次10分钟;
3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;
加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟,夏季时间可以短一些,生理盐水PBS清洗细胞2次;
DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;
吸去多余水分,加荧光封片液(中性或偏碱性缓冲液加等量甘油),盖上盖玻片,荧光或共聚焦显微镜下观察。
鬼笔环肽注意事项
鬼笔环肽的分子量小,很容易通过细胞,不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。
药品价格昂贵,0.1mg的售价接近两千元,要节约使用。
毒性较大,戴上手套操作。