DNA定量是DNA样品制备过程中的一项重要工作，Helixyte 绿色双链DNA定量检测试剂盒提供了一种用Helixyte Green BR快速测定dsDNA的方法。该测定法在三个数量级上是线性的，并且比紫外线吸收度读数灵敏度高几个数量级。Helixyte Green-BR与dsDNA结合后荧光增强，序列依赖性小，可准确测定基因组DNA、病毒DNA、miniprep-DNA或PCR扩增产物等多种来源的DNA样品。该方法对RNA上的双链DNA（dsDNA）具有高度的选择性，并且被优化以测量从10 pg/ul到10 ng/ul的DNA浓度。
适用仪器
荧光酶标仪
Ex:490 nm
Em：530 nm
Cutoff：510 nm
推荐孔板:纯黑色孔板
实验方案
样品实验方案
简要概述
1. 准备dSDNA标准品，测试样品和染料工作溶液
2. 添加DNA标准液或测试样品（50 uL）
3. 添加Helixyte Green-BR工作溶液（50 uL）
4. 在室温下孵育2分钟
5. 检测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度
提示：操作前将所有组件加热到室温。暂时没有关于Helixyte Green dsDNA染色剂的致突变性或毒性的数据。由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂，应谨慎处理。DMSO储备溶液应特别小心，因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。
溶液配制
标准溶液配制
将100 uL的100 ug / mL dsDNA标准溶液（组分C）添加到400 uL的测定缓冲液（组分B）中，以生成20 ug / mL的dsDNA标准溶液。然后用测定缓冲液（组分B）进行1：3的系列稀释，以得到0至20 ug / mL的系列稀释的dsDNA标准品。
工作溶液配制
Helixyte Green BR工作溶液：将50 uL Helixyte Green BR（组分A）添加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.050 mL。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。 注意：我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备该溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为了获得结果，应在准备后的几个小时内使用此溶液。
实验步骤
表1. 在透明底部96孔微孔板中的dsDNA标准品和测试样品的布局。DS = dsDNA标准品（DS1-DS7，20至0.027 ug / mL）; BL =空白对照；TS =测试样品
|
BL
|
BL
|
TS
|
TS
|
|
DS1
|
DS1
|
…
|
…
|
|
DS2
|
DS2
|
…
|
…
|
|
DS3
|
DS3
|
|
|
|
DS4
|
DS4
|
|
|
|
DS5
|
DS5
|
|
|
|
DS6
|
DS6
|
|
|
|
DS7
|
DS7
|
|
|
表2. 每个孔的试剂组成
|
Well
|
Volume
|
Reagent
|
|
DS1-DS7
|
50 uL
|
连续稀释 (20 to 0.027 ug/mL)
|
|
BL
|
50 uL
|
缓冲液 (Component B)
|
|
TS
|
50 uL
|
实验样品
|
1. 根据表1和表2提供的布局，制备dsDNA标准品（DS）、空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 uL试剂，而不是50 uL。注：根据需要处理细胞或组织样本。
2. 添加50 uL Helixyte Green-BR染料工作液（2X）分别加入dsDNA标准液、空白对照液和供试品中，使总分析体积为100ul/孔。对于384孔板，添加25 uL的Helixyte Green-BR染料工作溶液，每孔总体积为50 uL/孔。
3. 在室温下避光培养2分钟。
4. 在Ex/Em=490/530 nm（截止=515nm）处用荧光酶标仪检测荧光强度。
图示
图1.用Helixyte Green dsDNA定量试剂盒在96孔黑色孔板中测量了dsDNA剂量反应。