17.细胞欲冷冻保存时, 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度? 冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial, 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。
18.培养基中是否须添加***? 除于特殊筛选系统中外, 一般正常培养状态下, 培养基中不应添加任何***。 19.应如何避免细胞污染? 细胞污染的种类可分成**、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之*好方法。 20.如果细胞发生微生物污染时,应如何处理? 原则上:直接**后丢弃之。 当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是**、**、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室**剂**培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。 高浓度的***和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定***和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用***如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。 (1)在无***的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。 (2)分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择***加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。 (3)每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。 (4)确定***毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的***的培养液培养细胞2~3代。 (5)在无***的培养基中培养细胞一代。 (6)重复步骤4。 (7)在无***的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。 21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞, 是否能以肉眼观察出异状? 不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株, 无法以其外观分辨之。 22.支原体污染会对细胞培养有何影响? 支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数, 代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。 23.侦测出细胞株有支原体污染时, 该如何处理? 直接**后丢弃,以避免污染其它细胞株。 24. CO2 培养箱之水盘如何保持清洁? 定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。 25.为何培养基保存于4℃ 冰箱中, 颜色会偏暗红色, 且pH值会越来越偏碱性? 培养基保存于4℃冰箱中, 培养基内之CO2会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果, 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时, 可以通入无菌过滤之CO2, 以调整pH 值。
细胞培养技术是整个分子生物学实验的**步,关系到接下来整个实验的成功与否。以上,总结一下在细胞培养过程中可能遇到的疑惑和问题,希望能够为广大客户带来一点点的指引。本公司由海外华侨和多名海归博士组成的技术团队,主要致力于**学、分子生物学、病理学、代谢组学、生物化学技术在科研中的应用与推广,专业从事医学科研课题外包,项目申请、组织实施、检查评估、验收鉴定等服务。有着十分丰富的科研经验和实战技术,所以值得选择,以上信息仅供参考,详情请致电相关工作人员为您解答。
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