26.各种细胞培养用的dish,flask是否均相同? 不同厂牌的dish 或flask, 其所coating 的polymer 不同, 制造程序亦不同, 虽对大部分细胞没有太大之影响, 惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish 或flask 而有显著之生长差异。 27.购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形? 研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少, 大都是因为离心过程操作上的失误, 造成细胞的物理性损伤, 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心, 应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。 28.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因? 研究人员在细胞培养时出现存活率不佳, 常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后, 加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于-80℃太久。 29.如何避免沉淀物的产生? 我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作: (1)解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),非常容易产生沉淀物。 (2)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 (3)请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。 (4)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。 (5)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。 30. L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗? L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有*终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。 31.GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定? GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅**20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有*小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。 32.什么培养基中可以省去加酚红? 酚红在培养基中用作PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类**的作用,(特别是雌**)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。 33.如何用台盼兰计数活细胞? 用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2 000个/毫升,在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色细胞是死细胞。 细胞培养技术是整个分子生物学实验的**步,关系到接下来整个实验的成功与否。以上,总结一下在细胞培养过程中可能遇到的疑惑和问题,希望能够为广大客户带来一点点的指引。本公司由海外华侨和多名海归博士组成的技术团队,主要致力于**学、分子生物学、病理学、代谢组学、生物化学技术在科研中的应用与推广,专业从事医学科研课题外包,项目申请、组织实施、检查评估、验收鉴定等服务。有着十分丰富的科研经验和实战技术,所以值得选择,以上信息仅供参考,详情请致电相关工作人员为您解答。
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