(原核)可溶蛋白表达服务|实验技术服务

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(原核)可溶蛋白表达服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
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实验描述  
pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒所包含的原核表达载体(pCold-SUMO)是在pCold载体基础上改造而成(HaiGene**)，该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌，在低温下(15度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢，使得蛋白合成速度减慢，从而*大限度的提高了蛋白正确折叠的几率，提高了蛋白可溶性表达，增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的SUMO tag可以极大地提高小分子量蛋白的表达量，而且进一步提高了蛋白的可溶表达几率。同时，pCold-SUMO原核蛋白表达试剂盒配备的SUMO Protease(含 6×His 标签)可特异性去除SUMO tag，从而得到不含任何标签的重组蛋白。TEE 信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。BL21(DE3)Chaprone E.coli 细菌中含有分子伴侣蛋白质粒，其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性蛋白。 分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性（chloramphenicol，Cmr）的表达受控于四环素（tetR）操纵子。
组分名称 数量 保存
pCold-SUMO Vector (100 ng/μl) 50 μl -20℃
SUMO Protease (10 U/μl) 100 μl -70℃
10XSUMO Buffer 1 ml -20℃
3M NaCl 0.5 ml -20℃
BL21(DE3)Chaprone E.coli 100 μl -70℃
pCold-SUMO Primer-F 100 μl -20℃
pCold-SUMO Primer-R 100 μl -20℃
主要特征
冷启动子，低温诱导表达，*大限度地提高蛋白地可溶性
分子伴侣可协助蛋白的正确折叠
可大大的提高蛋白表达量
独特的SUMO蛋白酶可切割SUMO标签而得到不含任何多余氨基酸的蛋白
应用
包涵体蛋白的*佳解决方法，提高蛋白的可溶性优化表达。
Fig . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未诱导 
2. pET15b系统表达全菌体蛋白
3.pET15b系统表达上清液(可溶蛋白部分)
4.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)全菌体蛋白
5.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分)
6.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone全菌体蛋白
7.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分)
8.使用Ni-NTA Resin纯化SUMO融合蛋白
9.使用SUMO酶切除SUMO tag后的目的蛋白
泳道2和3表明使用pET系统表达几乎无可溶性蛋白表达，皆为包涵体；泳道4和5表明使用pCold-SUMO系统于BL21(DE3)菌中，可溶性蛋白表达约占40%；泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可进一步提高蛋白的可溶性表达。