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RIA(放射免疫法)|实验技术服务
日期:2024-09-12 17:46
浏览次数:481
摘要:关键词:RIA(放射免疫法)|实验技术服务
简介:世界****RIA(放射免疫法)|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
RIA(放射免疫法)|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:RIA(放射免疫法...
关键词:RIA(放射免疫法)|实验技术服务
简介:世界****RIA(放射免疫法)|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
RIA(放射免疫法)|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:RIA(放射免疫法)|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等,常可测至皮摩尔。本法虽然也用放射性物质,但一般都是在测试样品时再加入标记的同位素示踪物,此示踪物的放射性强度极低,一般不会对实验者引起辐射损伤。本法的缺点是有时会出现交叉反应、假阳性反应,组织样品处理不够迅速,不能灭活降解酶和盐及pH有时会影响结果等。
临床上甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),8 一微球蛋白(pz—MG ),铁蛋白(Fer),人绒毛膜促性腺激素p亚单位(HCG-13)等的检测都是竞争性RIA法原理。竞争性RIA法,根据加样顺序与温育次数的区别,反应方式分三种:平衡法,将非标记抗原(被测物与标准品)、抗体、标记抗原依次加入反应管,混匀后一次性温育至反应达到动态平衡,再加分离剂分离B(复合物)与F(游离物)如:AFP,8 一MG,Fer;顺序加样法,先将非标记抗原(被测物与标准品),与抗体在反应管内作**次温育,待反应达到动态平衡后。加入标记抗原,再作**次温育后,分离B与F如:CEA;急诊检测法:为临床急需检测结果而提出的反应方式,不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应;分离剂的选择有,PEG(聚乙二醇),**抗体等。
现在一般采用的是:**抗体与PEG合用的方法,称为双抗体一PEG法。
PEG原理:PEG浓度达到7 一9 时能使抗原一抗体复合物沉淀。
优点:经济,简便,通用。
缺点:重复性差,非特异性结合率高。
**抗体:**抗体是可与被测抗原进行特异结合的抗体,来自家兔或豚鼠。用**抗体为抗原,作用到羊,马身上,产生的抗**抗体的抗体称**抗体。**抗体与**抗体在适当条件下发生特异性结合,生成分子量很大的免疫复合物(AgAb ×Ab ),能自然沉淀。
优点:分离效果好。非特异性结合率低。
缺点:增加经费投入。需要**次温育,延长了时间。
所以就产生了两者合用的双抗体一PEG法,它结合了上述两种方法的优点。
二、非竞争性RIA,又称免疫放射分析(IRMA)
主要特点:标记的是抗体。
按反应原理分为两种:
(一)单位点IRMA
其原理:抗原只有一个抗原决定簇,所测的抗原为小分子抗原,Ab+AgAg Ab+ Ab+ ImAd—Ag ImAd—AgAb+Ag Ab(去除)(负相关):(ImAd—Ag)固相抗原免疫吸附剂,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原;双位点IRMA:抗原有两个抗原决定簇,所使用的两种亚型抗体在与同一抗原分子结合时互不干扰ImAd—Ab+AgImAd—Ab—Ag+ AbImAd-Ab—Ag- Ab+ Ab(过剩的,游离的):(ImAd—Ab)固相抗体免疫吸附剂,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗体。
(二)双位点IRMA,又称双抗体夹心法
从加样测定顺序上看,有三种方法:固相抗体先与未知抗原结合,再与标记抗体结合(正向两步法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原先与标记抗体结合,再与同相抗体结合(反向两步法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应(一步法,又称同时加样法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。
这三种方法都生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物,故又称双抗体夹心法。
糖类抗原CA50,CA125就用的是其中的第三种方法(一步法),血清中的未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应,生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物,然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。
三、RIA法的影响因素
pH和离子强度;反应温度,温度一般为37℃,也有45℃,室温,4℃ 冰箱;反应时间,操作中的注意事项:戴手套、防护镜等,将试剂盒从冰箱中取出,室温下放置30 min方可使用。
(1)编号:**排是标准管:根据标准品浓度由低到高A,B,C,D,E,F,G……;**排是被测样品1,2,3,4,5,6,……。
(2)加样要准确,移液器的使用(两个档位,一档吸人,二档排出)吸头(一个标本一个吸头,避免互相污染)。加试剂:先看瓶签,再摇匀,*后吸人。(标记物一般为红色,一抗为兰色)。
(3)温育时间要保证:按说明书中所要求的时间温育,可以延长,不能缩短。
(4)分离剂加入:混匀静置时间,可以延长,不能缩短。保证抗原抗体复合物与**抗体的充分结合。
(5)温度:注意观察水浴箱的水温,误差不能太大,为±1℃ ,室温21℃左右。
(6)离心时间:也应按说明书中所要求来操作,转速一般为3 500r/min。往离心机里放反应管时,尽量让它直立(因为倾斜可能会使液体流出)。吸上清液时,沉淀物在试管底部,真空泵的吸头头部不能直接插人到试管底部中央(会吸走沉淀物,而我们的目的是分离保留沉淀物),应该使吸头贴着试管管壁往下放,并且试管要稍微倾斜,但要在即将插到沉淀物边缘时停止,快速上升取出。少留一点点上清液也可。主要是保证沉淀物完整。
(7)进人免疫计数器测量时,注意观察做出的曲线好坏:是不是需要修改,剔除坏点。
(8)报结果:碰到异常结果,要再次看一看沉淀物是否都在,患者情况如何,结果是否与患者情况相符,方可报出。非竞争性RIA法中,清洗固相包被珠时,清洗次数要严格按说明书中所要求来操作,不得减少。
虽然RIA法的影响因素很多,但操作中只要注意上述事项,RIA法的稳定性还是相当不错的。主要是它存在放射污染,这个问题不易解决,影响了它以后的发展,如今电化学发光免疫分析,化学发光免疫分析,酶联免疫分析,磁酶免疫分析等相继推出,发展很快,RIA法将被淘汰。
简介:世界****RIA(放射免疫法)|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
RIA(放射免疫法)|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:RIA(放射免疫法)|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
RIA法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等,常可测至皮摩尔。本法虽然也用放射性物质,但一般都是在测试样品时再加入标记的同位素示踪物,此示踪物的放射性强度极低,一般不会对实验者引起辐射损伤。本法的缺点是有时会出现交叉反应、假阳性反应,组织样品处理不够迅速,不能灭活降解酶和盐及pH有时会影响结果等。
临床上甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),8 一微球蛋白(pz—MG ),铁蛋白(Fer),人绒毛膜促性腺激素p亚单位(HCG-13)等的检测都是竞争性RIA法原理。竞争性RIA法,根据加样顺序与温育次数的区别,反应方式分三种:平衡法,将非标记抗原(被测物与标准品)、抗体、标记抗原依次加入反应管,混匀后一次性温育至反应达到动态平衡,再加分离剂分离B(复合物)与F(游离物)如:AFP,8 一MG,Fer;顺序加样法,先将非标记抗原(被测物与标准品),与抗体在反应管内作**次温育,待反应达到动态平衡后。加入标记抗原,再作**次温育后,分离B与F如:CEA;急诊检测法:为临床急需检测结果而提出的反应方式,不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应;分离剂的选择有,PEG(聚乙二醇),**抗体等。
现在一般采用的是:**抗体与PEG合用的方法,称为双抗体一PEG法。
PEG原理:PEG浓度达到7 一9 时能使抗原一抗体复合物沉淀。
优点:经济,简便,通用。
缺点:重复性差,非特异性结合率高。
**抗体:**抗体是可与被测抗原进行特异结合的抗体,来自家兔或豚鼠。用**抗体为抗原,作用到羊,马身上,产生的抗**抗体的抗体称**抗体。**抗体与**抗体在适当条件下发生特异性结合,生成分子量很大的免疫复合物(AgAb ×Ab ),能自然沉淀。
优点:分离效果好。非特异性结合率低。
缺点:增加经费投入。需要**次温育,延长了时间。
所以就产生了两者合用的双抗体一PEG法,它结合了上述两种方法的优点。
二、非竞争性RIA,又称免疫放射分析(IRMA)
主要特点:标记的是抗体。
按反应原理分为两种:
(一)单位点IRMA
其原理:抗原只有一个抗原决定簇,所测的抗原为小分子抗原,Ab+AgAg Ab+ Ab+ ImAd—Ag ImAd—AgAb+Ag Ab(去除)(负相关):(ImAd—Ag)固相抗原免疫吸附剂,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原;双位点IRMA:抗原有两个抗原决定簇,所使用的两种亚型抗体在与同一抗原分子结合时互不干扰ImAd—Ab+AgImAd—Ab—Ag+ AbImAd-Ab—Ag- Ab+ Ab(过剩的,游离的):(ImAd—Ab)固相抗体免疫吸附剂,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗体。
(二)双位点IRMA,又称双抗体夹心法
从加样测定顺序上看,有三种方法:固相抗体先与未知抗原结合,再与标记抗体结合(正向两步法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原先与标记抗体结合,再与同相抗体结合(反向两步法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应(一步法,又称同时加样法)。然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。
这三种方法都生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物,故又称双抗体夹心法。
糖类抗原CA50,CA125就用的是其中的第三种方法(一步法),血清中的未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应,生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物,然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数。
三、RIA法的影响因素
pH和离子强度;反应温度,温度一般为37℃,也有45℃,室温,4℃ 冰箱;反应时间,操作中的注意事项:戴手套、防护镜等,将试剂盒从冰箱中取出,室温下放置30 min方可使用。
(1)编号:**排是标准管:根据标准品浓度由低到高A,B,C,D,E,F,G……;**排是被测样品1,2,3,4,5,6,……。
(2)加样要准确,移液器的使用(两个档位,一档吸人,二档排出)吸头(一个标本一个吸头,避免互相污染)。加试剂:先看瓶签,再摇匀,*后吸人。(标记物一般为红色,一抗为兰色)。
(3)温育时间要保证:按说明书中所要求的时间温育,可以延长,不能缩短。
(4)分离剂加入:混匀静置时间,可以延长,不能缩短。保证抗原抗体复合物与**抗体的充分结合。
(5)温度:注意观察水浴箱的水温,误差不能太大,为±1℃ ,室温21℃左右。
(6)离心时间:也应按说明书中所要求来操作,转速一般为3 500r/min。往离心机里放反应管时,尽量让它直立(因为倾斜可能会使液体流出)。吸上清液时,沉淀物在试管底部,真空泵的吸头头部不能直接插人到试管底部中央(会吸走沉淀物,而我们的目的是分离保留沉淀物),应该使吸头贴着试管管壁往下放,并且试管要稍微倾斜,但要在即将插到沉淀物边缘时停止,快速上升取出。少留一点点上清液也可。主要是保证沉淀物完整。
(7)进人免疫计数器测量时,注意观察做出的曲线好坏:是不是需要修改,剔除坏点。
(8)报结果:碰到异常结果,要再次看一看沉淀物是否都在,患者情况如何,结果是否与患者情况相符,方可报出。非竞争性RIA法中,清洗固相包被珠时,清洗次数要严格按说明书中所要求来操作,不得减少。
虽然RIA法的影响因素很多,但操作中只要注意上述事项,RIA法的稳定性还是相当不错的。主要是它存在放射污染,这个问题不易解决,影响了它以后的发展,如今电化学发光免疫分析,化学发光免疫分析,酶联免疫分析,磁酶免疫分析等相继推出,发展很快,RIA法将被淘汰。