企业信息
8
  • 入驻时间: 2014-06-10
  • 联系人:业务代表
  • 电话:400-968-7988
  • 联系时,请说明易展网看到的
  • Email:fuwu@bioleaf.com
文章详情

Southern Blot|实验技术服务

日期:2024-12-23 11:05
浏览次数:283
摘要:关键词:Southern Blot|实验技术服务 简介:世界****Southern Blot|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。 Southern Blot|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。 我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。 产品品牌:Southern Blot|实验技...
关键词:Southern Blot|实验技术服务
简介:世界****Southern Blot|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
Southern Blot|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:Southern Blot|实验技术服务   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
测序实验流程:
一、 待测核酸样品的制备
(一)制备待测DNA
基因组DNA是从动物组织(或)细胞制备。1.采用适当的化学试剂裂解细胞,或者用组织匀浆器研磨破碎组织中的细胞;2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白质和RNA;3.用有机试剂(酚/氯仿)抽提方法去除蛋白质。
(二) DNA限制酶消化
基因组DNA很长,需要将其切割成大小不同的片段之后才能用于杂交分析,通常用限制酶消化DNA。一般选择一种限制酶来切割DNA分子,但有时为了某些特殊的目的,分别用不同的限制酶消化基因组DNA。切割DNA的条件可根据不同目的设定,有时可采用部分和充分消化相结合的方法获得一些具有交叉顺序的DNA片段。消化DNA后,加入EDTA,65℃加热灭活限制酶,样品即可直接进行电泳分离,必要时可进行乙醇沉淀,浓缩DNA样品后再进行电泳分离。
二、 琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品
(一)基本原理
Southern印迹杂交是先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离,然后进行杂交。这样可确定杂交靶分子的大小。因此,制备DNA样品后需要进行电泳分离。在恒定电压下,将DNA样品放在0.8~1.0%琼脂糖凝胶中进行电泳,标准的琼脂糖凝胶电泳可分辨70-80000bp的DNA片段,故可对DNA片段进行分离。但需要用不同的胶浓度来分辨这个范围内的不同的DNA片段。原则是分辨大片段的DNA需要用浓度较低的胶,分辨小片段的DNA则需要浓度较高的胶。经过一段时间电泳后,DNA按分子量大小在凝胶中形成许多条带,大小相同的分子处于同一条带位置。另外为了便于测定待测DNA分子量的大小或是所处的分子大小范围,往往同时在样品邻近的泳道中加入已知分子量的DNA样品即标准分子量DNA (DNA marker)进行电泳。DNA marker可以用放射性核素进行末端标记,通过这种方式,杂交后的标准分子量DNA也能显影出条带。
(二) 基本步骤
1. 制备琼脂糖凝胶,尽可能薄。DNA样品与上样缓冲液混匀,上样。推荐使用的靶基因的上样量见不同条件下上样本的使用指针比较表。一般而言,对杂交系统,所需DNA样品的浓度较低,每道加2.5-5μg人类基因组DNA;如果基因组比人类DNA更复杂(如植物DNA)则上样量可达10μg;每道上质粒DNA<1ng。
2. 分子质量标志物(DIG标记)上样。
3. 电泳,使DNA条带很好的分离。不同条件下上样本的使用指针比较表
不同条件下上样本的使用指针比较表
4. 评价靶DNA的质量。在电泳结束后,0.25-0.50μg/mlEB染色15-30min,紫外灯下观察凝胶。