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Western Blotting|实验技术服务
日期:2024-09-12 17:45
浏览次数:297
摘要:关键词:Western Blotting|实验技术服务
简介:世界****Western Blotting|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
Western Blotting|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:Western Bl...
关键词:Western Blotting|实验技术服务
简介:世界****Western Blotting|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
Western Blotting|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:Western Blotting|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
对于Western Blotting实验而言,样品处理是关键步骤之一,获得的蛋白样品必须均质、可溶,并解离成单个多肽亚基,且尽量减少相互间的聚集,使其*终仅依赖本身的分子量大小进行分离。当目标蛋白的含量很低时,需要选取目标蛋白含量较高的组织或细胞器(如核抽提物),或者通过免疫沉淀等方式进行富集。通常样品有重组蛋白、细胞和组织等。
1.样品收集
1)培养的细胞
贴壁和悬浮细胞收集方式不同,细胞裂解液种类各异,推荐含SDS的凝胶加样缓冲液裂解,煮沸即可。
2)动物组织
与细胞不同,组织块由于体积较大,须预先经破碎匀浆处理。
2.样品定量
样品电泳前需测定蛋白浓度,以便保证上样量一致,有利于后续定量或半定量分析。常用的蛋白质浓度测定方法有好多种,其灵敏度和所需时间不同,且不同的方**受不同干扰物质的影响,实验者可根据样品制备方法(裂解液成分、去垢剂和还原剂种类等)自行选择。
注意事项:
a. 应尽量避免引入影响后续定量的杂蛋白(如细胞培养液、蛋白酶抑制剂等)及其他干扰物质;
b. 样品浓度应适中,1×SDS凝胶加样缓冲液建议用量:贴壁细胞按10cm2培养皿/0.1ml,悬浮细胞按5×106细胞/0.1ml比例加入;
c. SDS对蛋白质变性和电泳分离至关重要,浓度应控制在2-10%之间,并根据具体需要调整;
d. 制备好的样品可以在-20℃保存,但时间不宜过长,并避免反复冻融,否则蛋白会发生降解;
e. 内参对实验结果至关重要,应选择合适的内参。
Western印迹含一系列步骤,包括:
用聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白样品。
将胶上的蛋白转移到膜上。
鉴定膜上特定蛋白。
下面将从理论和实践方面讨论Western印迹方法。
用1-D或2-D凝胶分离复杂蛋白质混合物
印迹前分离复杂蛋白质混合物的*常见方法是一维(1-D)SDS-PAGE电泳,它根据蛋白质的分子量进行分离。有时用非变性电泳分离天然蛋白质。尽管这种方法通常缺乏变性电泳的分辨率,但当蛋白须保留生物活性时非常有用。
二维(2-D)凝胶电泳用于分析细胞、组织、和体液蛋白质的组成,是现代蛋白质组学的关键技术。2-D免疫印迹可提供分子量和等电点信息,并可用于区分翻译后修饰产生的不同蛋白质形式。有些情况下只进行1-D电泳分离也可用免疫印迹对蛋白分型。
简介:世界****Western Blotting|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
Western Blotting|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:Western Blotting|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
对于Western Blotting实验而言,样品处理是关键步骤之一,获得的蛋白样品必须均质、可溶,并解离成单个多肽亚基,且尽量减少相互间的聚集,使其*终仅依赖本身的分子量大小进行分离。当目标蛋白的含量很低时,需要选取目标蛋白含量较高的组织或细胞器(如核抽提物),或者通过免疫沉淀等方式进行富集。通常样品有重组蛋白、细胞和组织等。
1.样品收集
1)培养的细胞
贴壁和悬浮细胞收集方式不同,细胞裂解液种类各异,推荐含SDS的凝胶加样缓冲液裂解,煮沸即可。
2)动物组织
与细胞不同,组织块由于体积较大,须预先经破碎匀浆处理。
2.样品定量
样品电泳前需测定蛋白浓度,以便保证上样量一致,有利于后续定量或半定量分析。常用的蛋白质浓度测定方法有好多种,其灵敏度和所需时间不同,且不同的方**受不同干扰物质的影响,实验者可根据样品制备方法(裂解液成分、去垢剂和还原剂种类等)自行选择。
注意事项:
a. 应尽量避免引入影响后续定量的杂蛋白(如细胞培养液、蛋白酶抑制剂等)及其他干扰物质;
b. 样品浓度应适中,1×SDS凝胶加样缓冲液建议用量:贴壁细胞按10cm2培养皿/0.1ml,悬浮细胞按5×106细胞/0.1ml比例加入;
c. SDS对蛋白质变性和电泳分离至关重要,浓度应控制在2-10%之间,并根据具体需要调整;
d. 制备好的样品可以在-20℃保存,但时间不宜过长,并避免反复冻融,否则蛋白会发生降解;
e. 内参对实验结果至关重要,应选择合适的内参。
Western印迹含一系列步骤,包括:
用聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白样品。
将胶上的蛋白转移到膜上。
鉴定膜上特定蛋白。
下面将从理论和实践方面讨论Western印迹方法。
用1-D或2-D凝胶分离复杂蛋白质混合物
印迹前分离复杂蛋白质混合物的*常见方法是一维(1-D)SDS-PAGE电泳,它根据蛋白质的分子量进行分离。有时用非变性电泳分离天然蛋白质。尽管这种方法通常缺乏变性电泳的分辨率,但当蛋白须保留生物活性时非常有用。
二维(2-D)凝胶电泳用于分析细胞、组织、和体液蛋白质的组成,是现代蛋白质组学的关键技术。2-D免疫印迹可提供分子量和等电点信息,并可用于区分翻译后修饰产生的不同蛋白质形式。有些情况下只进行1-D电泳分离也可用免疫印迹对蛋白分型。