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单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务
日期:2024-09-12 18:15
浏览次数:303
摘要:关键词:单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务
简介:世界****单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产...
关键词:单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务
简介:世界****单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
其原理是: B淋巴细胞能够产生抗体, 但在体外不能进行无限分裂; 而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代, 但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。
一.提取合成专一性抗体的单个B淋巴细胞,但这种B淋巴细胞不能在体外生长。
二.应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,得到杂交瘤细胞。这种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性
三.对杂交瘤细胞进行细胞培养,选出所需要的细胞群,体外或体内培养,从培养液或动物腹水中提取单克隆抗体
单克隆抗体的提纯
一般常用金黄色葡萄球菌蛋白A-琼脂糖4B亲和层析法。
单克隆抗体的保存 由腹水中获得的抗体,经离心去除细胞成分,再经冷冻超速离心,取上清液加0.1%NaN3,少量分装,冷冻于-70℃可保存几年。 但应避免反复冻融,否则抗体失活,特别是IgM抗体。提纯的单克隆抗体,冷冻干燥保存于2~8℃,取出时溶解后,保存于2~8℃,至少一个月内可保持稳定。腹水抗体也可冷冻干燥低温(4℃)保存两年,融化后放置4℃下保存一个月。短期使用的腹水抗体,4℃3~4 个月仍保持稳定, 培养上清加0.1%NaN3,贮于-20℃,两年不失活性。
特点:
一是特异性,针对特定的单一抗原表位,它具有高度的特异性,抗肿瘤抗体药物的研究表明,其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。
二是多样性,主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。
三是定向性,抗体药物可以定向制造,就是根据需要制备具有不同治疗作用的抗体药物。
1 骨髓瘤细胞的准备
选择生长状态良好的SP2/0细胞,覆盖瓶底80%时弃上清,以不完全培养基洗涤一次后,用l0 mL不完全培养基将细胞轻轻吹下。
2 脾淋巴细胞的准备
取加强免疫后3天的小鼠,摘除眼球采血作为阳性血清;颈脱臼将小鼠致死,用75%酒精消毒体表10 min,随即放入超净台内的解剖板上,腹部朝上,四肢固定;无菌打开腹腔取出脾脏,用基础培养基洗涤,并仔细去掉周围附着的结缔组织;随后将脾脏转移到另一个盛有DMEM的平皿中。用研磨棒挤压,使脾细胞充分释放,制成脾细胞悬液。
3 饲养细胞的制备
取一只成熟健康的ICR小鼠,摘眼球采血作为阴性血清,颈脱臼处死;体表消毒和固定后,暴露腹膜,酒精棉球消毒腹膜;用l0 mL注射器,12#针头,吸取10 mL HAT培养基到腹腔,右手固定注射器,左手持酒精棉球轻轻按摩腹部,抽回腹腔内液体,注入己准备好的容器中。
4 融合
将上述制备的骨髓瘤细胞与脾细胞混合于一支50 mL的带盖的融合管中,1000 rpm离心10 min,弃上清。将融合管置于手掌中,轻轻摩擦底部,使两种细胞充分混匀;在37°C水浴中45 s内缓慢加入1 mL预热的PEG-1500到融合管中,边加边轻轻摇匀;随即在90 s内先慢后快滴加30 mL 37°C预热的不完全DMEM培养基,使PEG稀释而失去作用,37°C静置10 min,1000 rpm离心10 min;弃上清,用60 mL HAT培养基轻轻悬浮沉淀细胞,再加入适量的腹腔巨噬细胞;分装于96孔细胞培养板,然后将培养板置37°C 6% CO2培养箱内培养;5 d后用新鲜的HAT培养基换出一半培养基;10 d后用预热的HT换出HAT;观察杂交瘤细胞的生长情况,待其细胞培养上清变黄或克隆分布至孔底面积的1/10以上时,吸取适量细胞上清进行ELISA检测,两次检测结果为阳性设为阳性克隆孔。
杂交瘤细胞的克隆化及建株
采用有限稀释法对连续两次检测为阳性的细胞株进行克隆化。阳性细胞计数,取100个细胞放入5 mL含饲养细胞的培养液中,即20个细胞/mL,100 μL/孔滴加于96孔细胞培养板,即每孔1个细胞:再将余下的细胞悬液倍比稀释,细胞数为10 个/mL,100 μL /孔滴加于96孔细胞培养板,即每孔0.5个细胞。第8~9 d时,肉眼可见细胞克隆,对出现单个细胞克隆的孔再按筛选阳性杂交瘤细胞的间接ELISA方法进行筛选。连续进行三次以上亚克隆,判为阳性的细胞株扩大培养,建株冻存。
简介:世界****单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时,我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面,我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:单克隆抗体制备技术服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
其原理是: B淋巴细胞能够产生抗体, 但在体外不能进行无限分裂; 而瘤细胞虽然可以在体外进行无限传代, 但不能产生抗体。将这两种细胞融合后得到的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性。
一.提取合成专一性抗体的单个B淋巴细胞,但这种B淋巴细胞不能在体外生长。
二.应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,得到杂交瘤细胞。这种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性
三.对杂交瘤细胞进行细胞培养,选出所需要的细胞群,体外或体内培养,从培养液或动物腹水中提取单克隆抗体
单克隆抗体的提纯
一般常用金黄色葡萄球菌蛋白A-琼脂糖4B亲和层析法。
单克隆抗体的保存 由腹水中获得的抗体,经离心去除细胞成分,再经冷冻超速离心,取上清液加0.1%NaN3,少量分装,冷冻于-70℃可保存几年。 但应避免反复冻融,否则抗体失活,特别是IgM抗体。提纯的单克隆抗体,冷冻干燥保存于2~8℃,取出时溶解后,保存于2~8℃,至少一个月内可保持稳定。腹水抗体也可冷冻干燥低温(4℃)保存两年,融化后放置4℃下保存一个月。短期使用的腹水抗体,4℃3~4 个月仍保持稳定, 培养上清加0.1%NaN3,贮于-20℃,两年不失活性。
特点:
一是特异性,针对特定的单一抗原表位,它具有高度的特异性,抗肿瘤抗体药物的研究表明,其特异性主要表现为特异性结合、选择性杀伤靶细胞、体内靶向性分布以及具有更强的疗效。
二是多样性,主要表现在靶抗原的多样性、抗体结构的多样性、作用机制的多样性等方面。
三是定向性,抗体药物可以定向制造,就是根据需要制备具有不同治疗作用的抗体药物。
1 骨髓瘤细胞的准备
选择生长状态良好的SP2/0细胞,覆盖瓶底80%时弃上清,以不完全培养基洗涤一次后,用l0 mL不完全培养基将细胞轻轻吹下。
2 脾淋巴细胞的准备
取加强免疫后3天的小鼠,摘除眼球采血作为阳性血清;颈脱臼将小鼠致死,用75%酒精消毒体表10 min,随即放入超净台内的解剖板上,腹部朝上,四肢固定;无菌打开腹腔取出脾脏,用基础培养基洗涤,并仔细去掉周围附着的结缔组织;随后将脾脏转移到另一个盛有DMEM的平皿中。用研磨棒挤压,使脾细胞充分释放,制成脾细胞悬液。
3 饲养细胞的制备
取一只成熟健康的ICR小鼠,摘眼球采血作为阴性血清,颈脱臼处死;体表消毒和固定后,暴露腹膜,酒精棉球消毒腹膜;用l0 mL注射器,12#针头,吸取10 mL HAT培养基到腹腔,右手固定注射器,左手持酒精棉球轻轻按摩腹部,抽回腹腔内液体,注入己准备好的容器中。
4 融合
将上述制备的骨髓瘤细胞与脾细胞混合于一支50 mL的带盖的融合管中,1000 rpm离心10 min,弃上清。将融合管置于手掌中,轻轻摩擦底部,使两种细胞充分混匀;在37°C水浴中45 s内缓慢加入1 mL预热的PEG-1500到融合管中,边加边轻轻摇匀;随即在90 s内先慢后快滴加30 mL 37°C预热的不完全DMEM培养基,使PEG稀释而失去作用,37°C静置10 min,1000 rpm离心10 min;弃上清,用60 mL HAT培养基轻轻悬浮沉淀细胞,再加入适量的腹腔巨噬细胞;分装于96孔细胞培养板,然后将培养板置37°C 6% CO2培养箱内培养;5 d后用新鲜的HAT培养基换出一半培养基;10 d后用预热的HT换出HAT;观察杂交瘤细胞的生长情况,待其细胞培养上清变黄或克隆分布至孔底面积的1/10以上时,吸取适量细胞上清进行ELISA检测,两次检测结果为阳性设为阳性克隆孔。
杂交瘤细胞的克隆化及建株
采用有限稀释法对连续两次检测为阳性的细胞株进行克隆化。阳性细胞计数,取100个细胞放入5 mL含饲养细胞的培养液中,即20个细胞/mL,100 μL/孔滴加于96孔细胞培养板,即每孔1个细胞:再将余下的细胞悬液倍比稀释,细胞数为10 个/mL,100 μL /孔滴加于96孔细胞培养板,即每孔0.5个细胞。第8~9 d时,肉眼可见细胞克隆,对出现单个细胞克隆的孔再按筛选阳性杂交瘤细胞的间接ELISA方法进行筛选。连续进行三次以上亚克隆,判为阳性的细胞株扩大培养,建株冻存。