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核酸提取与纯化|实验技术服务

日期:2024-12-23 10:32
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摘要:关键词:核酸提取与纯化|实验技术服务 简介:世界****核酸提取与纯化|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。 核酸提取与纯化|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。 我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。 产品品牌:核酸提取与纯化|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html 测序实验流程: 1.核酸的提取...
关键词:核酸提取与纯化|实验技术服务
简介:世界****核酸提取与纯化|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
核酸提取与纯化|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:核酸提取与纯化|实验技术服务   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
1.核酸的提取
核酸都溶于水,而不溶于有机溶剂,利用此性质进行提取。在细胞内DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(RNP),在不同浓度的盐溶液中它们的溶解度差别很大,DNP在纯水或1 mol/LNaCl溶液中溶解度较大,但在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度很低,相反,RNP易溶解。因此,用0.14mol/LNaCl溶液可简单地初步分开DNP和RNP。
在分离核酸中*困难的是将核酸与紧密结合的蛋白质分开,而且还要避免核酸的降解。常用的解离剂是阴离子去垢剂,如脱氧胆酸钠,十二烷基硫酸钠(SDS),4-氨基水杨酸钠和萘-1,5-二磺酸钠等,它们具有溶解病毒、细菌的作用,可使核酸从蛋白质上游离出来,还具有抑制核糖核酸酶的作用。另外除去核酸中的蛋白质的一个有效办法是用酚-氯仿混合液,它们可使蛋白质变性,并对核糖核酸酶有抑制作用,另外氯仿比重大可使有机相和水相完全分开,减少残留在水相中的酚。在用酚-氯仿抽提核酸提取液时,还须要剧烈振摇,为防止起泡和促使水相与有机相的分离,在酚-氯仿抽提液中再加上一定量的异戊醇。
2. 核酸的纯化
核酸的纯化*关键步骤是去除蛋白质,通常只要用酚/氯仿、氯仿抽提核酸的水溶液即可。每当需要把DNA克隆操作的某一步所用的酶灭活或去除以便进行下一步时,可进行这种抽提。然而,如果从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸,则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后,再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等,它们对多数天然蛋白质均有活性。
用酚/氯仿抽提:这两种有机溶剂合用,比单独用酚抽提除蛋白效果更佳。继而用氯仿抽提则可除去核酸制品中的痕量酚。具体步骤如下:
①核酸样品置有盖小离心管中,加入等体积的酚/氯仿;②旋涡混匀管内容物,使呈乳状;③12000g室温离心15s;④水相移入另一离心管,弃去两相界面和有机相;⑤重复步骤①~④,直至两相界面上无蛋白质为止;⑥加入等体积的氯仿并重复②~④步操作;⑦按下述核酸浓缩法沉淀回收核酸。
3.核酸的浓缩
应用*广的核酸浓缩法是乙醇沉淀法。在中等浓度单价阳离子存在下,加入一定量的乙醇后,所形成的核酸沉淀可经离心而回收。甚至对低至pg(皮克)量的DNA或RNA,也可定量回收。回收的核酸可按所需浓度,再溶于适当的缓冲液中。具体操作时,可向含样品的小离心管中加入单价阳离子盐贮存液。单价阳离子盐的选择,主要基于下述考虑:用醋酸铵可减少dNTP的共沉淀,但在以后要作核酸的磷酸化时应避免用醋酸铵,因铵离子是多核苷酸激酶的强烈抑制剂。当用较高浓度的乙醇沉淀RNA时,常用LiCl,因LiCl在乙醇中溶解度很高,不随核酸共沉淀。含有SDS的核酸样品,应使用NaCl,这时该去垢剂在70%乙醇中仍保持可溶。
DNA和RNA的沉淀,大多使用醋酸钠(pH5.2)。
产品组成:
集液管
核酸纯化柱的集液管由医疗级的聚丙烯制成,容量为2ml和50ml。
Column
核酸纯化柱的column由医疗级的聚丙烯制成,底部为网状或带接口,容量约为1ml或25ml。
垫片
核酸纯化柱的垫片为特殊纤维材料,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,对大部分的生物分子不会产生吸附。
滤膜
经过特别优化的进口原料的硅胶膜或者玻璃纤维膜,*大程度的吸附核酸分子。