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流式细胞术检测技术服务|实验技术服务
日期:2024-12-23 18:32
浏览次数:253
摘要:关键词:流式细胞术检测技术服务|实验技术服务
简介:世界****流式细胞术检测技术服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
流式细胞术检测技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:流式细胞术检测技术服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html...
关键词:流式细胞术检测技术服务|实验技术服务
简介:世界****流式细胞术检测技术服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
流式细胞术检测技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:流式细胞术检测技术服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
PI 染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm , 5min,弃上清液。
2、加入PBS 1ml离心洗涤1次,弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精,4℃固定30min,或是-20℃固定。
4、离心,弃上清液。
5、用1×PBS 1ml洗涤1次,离心。
6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,37℃孵育30min,离心。
7、用1×PBS 1ml洗涤1次,离心。
8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,室温避光孵育30min。
9、混匀,过300目筛网,置流式管中, 4℃冰箱保存,待测。
细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm,5min,弃上清液。
2、以冷PBA 1ml,离心洗涤,弃上清液。
3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀,4℃或置冰上孵育30min-1h。
4、离心弃上清液。
5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次,以除去未结合的多余抗体成分。
6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀,置流式管中,4℃避光保存,待测。
胞内直接免疫荧光染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm , 5min,弃上清液。
2、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。
3、4%PFA 1ml,4℃固定30min。
4、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。
5、0、1% Triton-100 1ml, 室温10min。
6、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。
7、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul,用微量移液器轻轻吹打混匀,4℃或置冰上孵育30min-1h。
8、离心弃上清液。
9、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次,以除去未结合的多余抗体成分。
10、向细胞中加入冷PBS500ul,吹打混匀,置流式管中,4℃避光保存,待测。
备注:
1、RNase A:贮液浓度:1mg/ml;
工作液配制:加1 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×PBS中,使终浓度为 20ug/ml。
2、PI:贮液浓度:2、5mg/ml;
工作液配制:加2、5 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×PBS中,使终浓度为 50ug/ml。
3、PBA:即PBS加1-2% 牛血清白蛋白,加0、1%叠氮钠。
4、检测样品细胞浓度1x106 /ml。
流式细胞术测细胞表面抗原步骤
1. 定量细胞浓度
2. 分为2组,一组为实验组,另一组为抗体对照组
3. 两组都先加入非特异性的IgG,封闭可能的Fc受体
4. 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体,对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。
5. 4°孵育半小时
6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍
7. 上机后先用抗体对照组设置阴性Gate。
8. 检测样本。
方法学程序
(1) 将适合于酶消化的组织置于离心管中;
(2) 将选好的酶溶液1-2ml加入盛有被消化组织的试管中;
(3) 一般消化20-30分钟(恒温37℃或室温),消化期间要间断振荡或吹打;
(4) 终止消化,收集细胞悬液,以300目尼龙网过滤,除去细胞团块,以低速成离心除去细胞碎片;
(5) 将制备好的单细胞悬液进行进一步荧光染色后上机检测,或保存备用。
简介:世界****流式细胞术检测技术服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
流式细胞术检测技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
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测序实验流程:
PI 染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm , 5min,弃上清液。
2、加入PBS 1ml离心洗涤1次,弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精,4℃固定30min,或是-20℃固定。
4、离心,弃上清液。
5、用1×PBS 1ml洗涤1次,离心。
6、加入RNase A (工作浓度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,37℃孵育30min,离心。
7、用1×PBS 1ml洗涤1次,离心。
8、加入PI(工作浓度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,室温避光孵育30min。
9、混匀,过300目筛网,置流式管中, 4℃冰箱保存,待测。
细胞表面直接免疫荧光染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm,5min,弃上清液。
2、以冷PBA 1ml,离心洗涤,弃上清液。
3、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul。用微量移液器轻轻吹打混匀,4℃或置冰上孵育30min-1h。
4、离心弃上清液。
5、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次,以除去未结合的多余抗体成分。
6、向细胞中加入冷PBS 500ul,吹打混匀,置流式管中,4℃避光保存,待测。
胞内直接免疫荧光染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中,离心,1500rpm , 5min,弃上清液。
2、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。
3、4%PFA 1ml,4℃固定30min。
4、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。
5、0、1% Triton-100 1ml, 室温10min。
6、用1×PBS1ml洗涤1次,离心。
7、加入用PBA稀释的荧光素标记的抗体200ul,用微量移液器轻轻吹打混匀,4℃或置冰上孵育30min-1h。
8、离心弃上清液。
9、加入冷PBS1ml,离心洗涤2次,以除去未结合的多余抗体成分。
10、向细胞中加入冷PBS500ul,吹打混匀,置流式管中,4℃避光保存,待测。
备注:
1、RNase A:贮液浓度:1mg/ml;
工作液配制:加1 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×PBS中,使终浓度为 20ug/ml。
2、PI:贮液浓度:2、5mg/ml;
工作液配制:加2、5 mg/ml贮液 10ul于500ul 1×PBS中,使终浓度为 50ug/ml。
3、PBA:即PBS加1-2% 牛血清白蛋白,加0、1%叠氮钠。
4、检测样品细胞浓度1x106 /ml。
流式细胞术测细胞表面抗原步骤
1. 定量细胞浓度
2. 分为2组,一组为实验组,另一组为抗体对照组
3. 两组都先加入非特异性的IgG,封闭可能的Fc受体
4. 按照抗体生产厂家的推荐浓度加入抗体,对照组加入同样荧光标记的非特异性同型抗体。
5. 4°孵育半小时
6. 用含0.5% BSA的PBS洗2遍
7. 上机后先用抗体对照组设置阴性Gate。
8. 检测样本。
方法学程序
(1) 将适合于酶消化的组织置于离心管中;
(2) 将选好的酶溶液1-2ml加入盛有被消化组织的试管中;
(3) 一般消化20-30分钟(恒温37℃或室温),消化期间要间断振荡或吹打;
(4) 终止消化,收集细胞悬液,以300目尼龙网过滤,除去细胞团块,以低速成离心除去细胞碎片;
(5) 将制备好的单细胞悬液进行进一步荧光染色后上机检测,或保存备用。