企业信息
8
  • 入驻时间: 2014-06-10
  • 联系人:业务代表
  • 电话:400-968-7988
  • 联系时,请说明易展网看到的
  • Email:fuwu@bioleaf.com
文章详情

免疫沉淀服务|实验技术服务

日期:2024-12-23 23:30
浏览次数:369
摘要:关键词:免疫沉淀服务|实验技术服务 简介:世界****免疫沉淀服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。 免疫沉淀服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。 我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。 产品品牌:免疫沉淀服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html 测序实验流程: 材料 1, 蛋白...
关键词:免疫沉淀服务|实验技术服务
简介:世界****免疫沉淀服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
免疫沉淀服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:免疫沉淀服务|实验技术服务   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
测序实验流程:
材料
1,  蛋白A 或蛋白G
2,  一抗
3,  免疫沉淀缓冲液:20 mM 磷酸钠, pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP40, 0.5% 脱氧胆酸钠 and 0.02% 叠氮化钠.
(> NOTE: 50 mM 醋酸钠缓冲液, pH 5.0,. 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP-40 and 0.02%叠氮化钠 也可作为免疫沉淀的缓冲液,能提高蛋白G的结合功效)
4,  洗脱液:0.1 M 甘氨酸-HCl buffer, pH 2.5
5,  SDS-PAGE 上样缓冲液 (pH 6.8): 2% SDS, 62.5 mM Tris 碱, 10% 甘油, 2-5% 
实验流程为:
1.用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。
2.将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中,在微量离心机上4℃以*大速度离心15 min。
3.收集上清(约30 ml)并加入30μg的适当抗体,4℃摇动免疫沉淀物1 h。
4.加入0.9 ml的蛋白质A-Sepharose 悬液,4℃摇动免疫沉淀物30 min。
5.用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物,再重复洗5次。*后,用NETN洗一次。
6.吸出混合物的液体部分。加入800μl的1×SDS胶加样缓冲液到球珠中,煮沸4 min。
7.将样品加入到大孔的不连续SDS-PAGE梯度胶中,在10 mA的恒定电流下电泳。
8.通过考马斯蓝染色观察蛋白质泳带。
9.从胶上切下目标带,将其放到微量离心管中,用1ml 50%乙腈洗两次,每次3 min。
10. 用胰蛋白酶消化胶中的蛋白质,再将肽电洗脱。
11. 通过窄孔高效液相色谱分离肽。将收集的肽在ABI 477A或494A机器上进行自动Edman降解测序。