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探针合成服务|实验技术服务
日期:2024-12-24 09:59
浏览次数:252
摘要:关键词:探针合成服务|实验技术服务
简介:世界****探针合成服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
探针合成服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:探针合成服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
1、 合成cDNA步骤
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关键词:探针合成服务|实验技术服务
简介:世界****探针合成服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
探针合成服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:探针合成服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
1、 合成cDNA步骤
(1) 加入从卵巢癌细胞或组织中提取的总RNA ≥ 5ug。
(2) 加入 Nuclease-free 水 75 ul
(3) 加入 5x iScript Reaction Mix,按20 ul/ 100ul 比例加入。
(4) 加入 iScript RT,5 ul.
(5) 在pcr仪上,按以下步骤进行加热:
5 minutes at 25°C;30 minutes at 42°C;5 minutes at 85°C。
储存在 –20C冰箱。
2、 扩增ERCC2目的片段
(1) 订购ERCC2引物,序列如下:
F:5'-CCGctcgagGCTCCTGGTCTACTTCCCGTACG-3'
R:5'-ATTTgcggccGCACGCAGCCGCCACTTCACGTAC-3'
(2) 准备反应液:
按以下试剂比例进行反应MIX的配置:
10x reaction buffer 5 ul (1x)
dNTPs (stock 10 mM) 1.0 ul (200uM
Forward primer (250uM) 1.0 ul (0.2 uM)
Reverse primer (250 uM) 1.0 ul ( 0.2 uM)
cDNA template 1 ul (1 ug)
Taq PCR Polymerase enzyme 0.5 ul
ddH20 up to 50 ul
Total 50 ul
(3) PCR 反应过程
1) 准备PCR仪,并检查是否可用。
2) 打开PCR仪顶盖,将96PCR板放置在加热模块上盖紧顶盖;
3) 选择程序如下:
1cycle:94’C,3 min
35 cycles: 94’C,30s;62’C,1 min;72’C,1.5 min
1cycle:72’C,7 min;4’C forever
(4) 配制琼脂糖凝胶:
1) 取出干燥的铺胶板。
2) 称取2.5g 的琼脂糖,放入250ml 的容量瓶中,用量筒量取250ml 的1x TAE 加入容量瓶中,轻轻摇晃2-3 下。
3) 将盛有TAE 和琼脂糖的容量瓶放入微波炉中,高火加热4min。
4) 小心取出,室温冷却5-10min,稍微摇晃混匀,待溶液温度冷却到60℃(不烫手为宜),混匀。
5) 将琼脂糖溶液倒入事先准备胶槽中,将梳子放置在胶槽上,室温避光放置30min 左右。
6) 待凝胶干燥后备用。
简介:世界****探针合成服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
探针合成服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:探针合成服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
1、 合成cDNA步骤
(1) 加入从卵巢癌细胞或组织中提取的总RNA ≥ 5ug。
(2) 加入 Nuclease-free 水 75 ul
(3) 加入 5x iScript Reaction Mix,按20 ul/ 100ul 比例加入。
(4) 加入 iScript RT,5 ul.
(5) 在pcr仪上,按以下步骤进行加热:
5 minutes at 25°C;30 minutes at 42°C;5 minutes at 85°C。
储存在 –20C冰箱。
2、 扩增ERCC2目的片段
(1) 订购ERCC2引物,序列如下:
F:5'-CCGctcgagGCTCCTGGTCTACTTCCCGTACG-3'
R:5'-ATTTgcggccGCACGCAGCCGCCACTTCACGTAC-3'
(2) 准备反应液:
按以下试剂比例进行反应MIX的配置:
10x reaction buffer 5 ul (1x)
dNTPs (stock 10 mM) 1.0 ul (200uM
Forward primer (250uM) 1.0 ul (0.2 uM)
Reverse primer (250 uM) 1.0 ul ( 0.2 uM)
cDNA template 1 ul (1 ug)
Taq PCR Polymerase enzyme 0.5 ul
ddH20 up to 50 ul
Total 50 ul
(3) PCR 反应过程
1) 准备PCR仪,并检查是否可用。
2) 打开PCR仪顶盖,将96PCR板放置在加热模块上盖紧顶盖;
3) 选择程序如下:
1cycle:94’C,3 min
35 cycles: 94’C,30s;62’C,1 min;72’C,1.5 min
1cycle:72’C,7 min;4’C forever
(4) 配制琼脂糖凝胶:
1) 取出干燥的铺胶板。
2) 称取2.5g 的琼脂糖,放入250ml 的容量瓶中,用量筒量取250ml 的1x TAE 加入容量瓶中,轻轻摇晃2-3 下。
3) 将盛有TAE 和琼脂糖的容量瓶放入微波炉中,高火加热4min。
4) 小心取出,室温冷却5-10min,稍微摇晃混匀,待溶液温度冷却到60℃(不烫手为宜),混匀。
5) 将琼脂糖溶液倒入事先准备胶槽中,将梳子放置在胶槽上,室温避光放置30min 左右。
6) 待凝胶干燥后备用。