细胞传代培养技术服务|实验技术服务

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测序实验流程：
实验材料和器材
材料:培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，培养细胞。
药品:培养基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25%胰蛋白酶，Hank's液。
仪器:CO₂培养箱，倒置显微镜，超净台。
实验步骤
1.人无菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒双手。
2.倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。
3.超净台台面应整洁，用0.1%新洁尔灭溶液擦净。
4.打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。
5.点燃酒精灯;取出无菌试管，巴斯德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
6.将培养用液瓶口用75%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
7.倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3mLHanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。
8.每个大培养瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7~10mL/大瓶，3~5mL/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO₂气体的进入，将培养瓶放回CO₂培养箱。
10.对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。
【注意事项】
1.传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次*好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。
2.每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。
3.如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等.