细胞划痕实验(Wound Healing)技术服务|实验技术服务

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测序实验流程：
细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”**。 基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。 
特点： 
1.  在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。
2.  非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。
3.  与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。
4.  研究细胞迁移的体外实验中*简单的方法。
实验步骤： 
1.  培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记（方便拍照时定位同一 个视野）。
2.  细胞消化后接入12孔板，数量以贴壁后铺满板底为宜（数量少时可培养一段时间至铺满板底）。
3.  细胞铺满板底后，用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。（人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性，影响实验结果，这也是该方法*大的缺陷。）
4.  吸去细胞培养液，用PBS冲洗孔板三次，洗去划痕产生的细胞碎片。
5.  加入无血清培养基，拍照记录。
6.  将培养板放入培养箱培养，每隔4-6小时取出拍照。
7.  根据收集图片数据分析实验结果。
流程：
1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为能铺满。
3.**天用头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。
注意事项
1.  照相前一定要晾干，照相时将小室正置于载玻片上，在倒置显微镜下观察、照相。
2.  使用 Matrivgel前应从-20℃转移至4℃待其自然溶化，避免反复冻融。
3.  使用时需接触 Matrivgel的试管、移液吸头等均应预冷于4℃。