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细胞永生化服务|实验技术服务
日期:2024-12-25 00:30
浏览次数:267
摘要:关键词:细胞永生化服务|实验技术服务
简介:世界****细胞永生化服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
细胞永生化服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:细胞永生化服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
实验步骤:
...
关键词:细胞永生化服务|实验技术服务
简介:世界****细胞永生化服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
细胞永生化服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:细胞永生化服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
实验步骤:
1. EB病毒液的制备
复苏B95.8细胞株,使用培养基为10% FCS RPMI-1640
逐步添加培养基至细胞长至对数生长期
细胞计数,调节细胞数量为1×10^6个/ml
在CO2培养箱中继续续培养10天,中间不换液
至第10天收集培养上清,1800rpm,4℃离心15分钟
0.22μm滤器过滤,1ml/支分装,冻存于液氮备用
2. 病人外周血液的采集、分离
① 取病人外周血4ml+4mlBSS,混匀
② 各取4ml缓慢加入含有3ml淋巴细胞分离液Ficoll PLUS-Paque(GE Healthcare Bio-Sciences货号:71716700,使用前,充分混匀)的10ml离心管中(分两管进行)
③ 400g,18℃,离心30min
④ 小心吸取上层血浆,保存备用,避免扰动细胞。
⑤ 小心吸取淋巴细胞层至新的15ml离心管中
⑥ 加入6mlBSS,以吸管轻轻重悬细胞
⑦ 100g,18℃,离心10min,弃上清
⑧ 以8mlBSS再次洗涤一遍,离心,弃上清(重悬同时进行细胞计数)
(一般1ml血能分离出1×10^6个细胞,故4ml血约有4×10^6个细胞)
3. EB病毒转化淋巴细胞
① 取EBV上清1ml重悬上述细胞,37℃水浴,2h,20min晃动一次
② 加入3ml 20%FBS-1640全培,含0.2 μg/ml cyclosporin A (环孢素A Sigma Product No. C1832 )
③ 分两孔,2ml/孔加至24孔板中(如果分离的血量大,请酌情考虑加入25cm2培养瓶中培养),37℃,5%CO2培养
④ 一般24h后即可见到细胞聚集成团生长,3-5天可见液体PH值发生变化,呈橙黄色,早期视情况补液,待细胞生长良好再采用半量换液(培养基为 20%FBS-1640全培,含0.2 μg/ml cyclosporin A)
⑤ 一般15天左右即可建立稳定生长的淋巴母细胞。
简介:世界****细胞永生化服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
细胞永生化服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:细胞永生化服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
实验步骤:
1. EB病毒液的制备
复苏B95.8细胞株,使用培养基为10% FCS RPMI-1640
逐步添加培养基至细胞长至对数生长期
细胞计数,调节细胞数量为1×10^6个/ml
在CO2培养箱中继续续培养10天,中间不换液
至第10天收集培养上清,1800rpm,4℃离心15分钟
0.22μm滤器过滤,1ml/支分装,冻存于液氮备用
2. 病人外周血液的采集、分离
① 取病人外周血4ml+4mlBSS,混匀
② 各取4ml缓慢加入含有3ml淋巴细胞分离液Ficoll PLUS-Paque(GE Healthcare Bio-Sciences货号:71716700,使用前,充分混匀)的10ml离心管中(分两管进行)
③ 400g,18℃,离心30min
④ 小心吸取上层血浆,保存备用,避免扰动细胞。
⑤ 小心吸取淋巴细胞层至新的15ml离心管中
⑥ 加入6mlBSS,以吸管轻轻重悬细胞
⑦ 100g,18℃,离心10min,弃上清
⑧ 以8mlBSS再次洗涤一遍,离心,弃上清(重悬同时进行细胞计数)
(一般1ml血能分离出1×10^6个细胞,故4ml血约有4×10^6个细胞)
3. EB病毒转化淋巴细胞
① 取EBV上清1ml重悬上述细胞,37℃水浴,2h,20min晃动一次
② 加入3ml 20%FBS-1640全培,含0.2 μg/ml cyclosporin A (环孢素A Sigma Product No. C1832 )
③ 分两孔,2ml/孔加至24孔板中(如果分离的血量大,请酌情考虑加入25cm2培养瓶中培养),37℃,5%CO2培养
④ 一般24h后即可见到细胞聚集成团生长,3-5天可见液体PH值发生变化,呈橙黄色,早期视情况补液,待细胞生长良好再采用半量换液(培养基为 20%FBS-1640全培,含0.2 μg/ml cyclosporin A)
⑤ 一般15天左右即可建立稳定生长的淋巴母细胞。