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细胞转染服务|实验技术服务

日期:2024-12-25 00:08
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摘要:关键词:细胞转染服务|实验技术服务 简介:世界****细胞转染服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。 细胞转染服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。 我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。 产品品牌:细胞转染服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html 测序实验流程: 一、细胞传代 1. 试...
关键词:细胞转染服务|实验技术服务
简介:世界****细胞转染服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
细胞转染服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:细胞转染服务|实验技术服务   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
一、细胞传代
1. 试验准备:200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。
2. 弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次
3. 用tip头加入1ml Trypsin液,消化1分钟(37℃,5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。
4. 加入1ml的含血清培养基终止反应。
5. 用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。
6. 将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。
7. 用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。
8. 将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。
9. 将培养皿转入CO2培养箱中培养,**天转染。
二、细胞转染
1. 转染试剂的准备
① 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养基继续培养24-48小时。
三、**次细胞传代
1. 在转染后24小时,观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。
2. 再次进行细胞传代,按照免疫染色合适的密度0.8X105个细胞/35mm培养皿将细胞重新转入培养皿中。
3. 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。
慢病毒转染贴壁细胞实验方法
1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。
2、**天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。
3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。
4、继续培养24小时,用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。
5、继续培养。如果慢病毒含有荧光蛋白,一般转染48小时后可见明显荧光表达,72小时后更加明显。如需FACS检测转染效率,可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选,可以在转染3-4天后开始加药。
二、慢病毒转染悬浮细胞实验方法
1、在2×10^5/ml悬浮细胞中加入polybrene至6 μg/ml和适量病毒,充分混匀。37℃孵育。或者150g室温离心4小时(选作,部分难转染的细胞系采用此步骤可以提高转染效率)。
2、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后(或离心结束后)加入等体积新鲜培养基以稀释polybrene。
3、继续培养3-4天。中间视细胞生长情况可传代或换液。