原位分子杂交|实验技术服务

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测序实验流程：
实验方法及步骤
1.  探针变性
将探针在75℃恒温水浴中温育5 min，立即置0℃，5～10 min，使双链DNA探针变性。
2.  标本变性
（1）将制备好的染色体玻片标本于50℃培养箱中烤片2～3 h。（经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。 
（2）取出玻片标本，将其浸在70～75℃的体积分数70% 甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2～3 min。 
（3）立即按顺序将标本经体积分数70%、体积分数90%和体积分数100%冰乙醇系列脱水，每次5 min，然后空气干燥。
3.  杂交
将已变性或预退火的DNA探针10 μL 滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上18×18盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37℃杂交（约15～17 h）。由于杂交液较少，而且杂交温度较高，持续时间又长，因此为了保持标本的湿润状态，此过程在湿盒中进行。
4.  洗脱
此步骤有助于除去非特异性结合的探针，从而降低本底。
（1） 杂交次日，将标本从37℃温箱中取出，用刀片轻轻将盖玻片揭掉。 
（2） 将已杂交的玻片标本放置于已预热42～50℃的体积分数50%甲酰胺/2×SSC中洗涤3次，每次5 min。 
（3） 在已预热42～50℃的1×SSC中洗涤3次，每次5 min。 
（4） 在室温下，将玻片标本于2×SSC中轻洗一下。 
（5） 取出玻片，自然干燥。 
（6） 取200 μL复染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片标本上，盖上盖玻片。
5.  杂交信号的放大（适用于使用生物素标记的探针）
（1） 在玻片的杂交部位加150 μL封闭液I，用保鲜膜覆盖，37℃温育20min。 
（2） 去掉保鲜膜，再加150 μL avidin-FITC于标本上，用保鲜膜覆盖，37℃继续温育40 min。 
（3） 取出标本，将其放入已预热42～50℃的洗脱液中洗涤3次，每次5 min。 
（4） 在玻片标本的杂交部位加150 μL封闭液II，覆盖保鲜膜，37℃温育20 min。
（5） 去掉保鲜膜，加150 μL antiavidin于标本上，覆盖新的保鲜膜，37℃温育40 min。 
（6） 取出标本，将其放入已预热42～50℃的新洗脱液中，洗涤3次，每次5 min。 
（7） 重复步骤（1）、（2）、（3），再于2×SSC中室温清洗一下。 
（8） 取出玻片，自然干燥。 
（9） 取200 μL PI/antifade染液滴加在玻片标本上，盖上盖玻片。