真核表达技术服务|实验技术服务

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真核表达技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
pEGFP-N1载体具有以下几方面特点：
①从结构上看，该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这（图）真核细胞表达载体
真核细胞表达载体
是保证目的基因稳定表达的因素之一；
②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达；
③具有多克隆位点，便于目的基因的插入；
④该载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。
绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)基因来源于Jellyfish Aequorea Victoria， 是Shimomura等于1962年发现的蛋白质，由238个氨基酸组成，分子量约为27Kd。GFPGFP在包括热、极端PH和化学变性剂等苛刻条件下都很稳定，用甲醛固定后会持续发出荧光，但在还原环境下荧光会很快熄灭。
与以往常用的报告基因相比，GFP具有以下优点：
①在荧光显微镜下，用波长约490 nm的紫外线激发后，即可观察到绿色荧光，直接、简捷、便于检测；
②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响，保证了极高的检出率；
③蛋白本身性质稳定；
④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性；
⑤其基因片段长度较小(约717 bp)，易于构建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持荧光激发活性，为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。EGFP是一种优化的突变型GFP，使其产生的荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。EGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影响其发光。
首先也是*重要的的载体的酶切，载体是否没切好很关键。
1.如果有已经构建好的PCDNA-A，让然要和需要的酶切位点一致，直接把这个重组载体用xhol1和Ecorl 1酶切，然后*好CIP（去磷酸化），连接的时候要做自连对照
2.PCDNA载体直接用xhol1和Ecorl 1酶切，酶切后要和未酶切的载体一起跑胶，看一下是否切开
3.查看下PCDNA质粒图谱，看下酶切位点的上下游和你的目的基因设计的引物酶切位点的上下游是否一致
4.做连接的时候要做对照.
5.可以用其他载体用同样的酶切，比如pet-28a，看能否连上目的基因，以此检验目的基因是否切好.